转录因子c-Jun通过调控β3GnT8表达改变肝癌细胞侵袭、迁移机制研究

发布时间：2017-06-25 22:16

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【摘要】：目的:探讨转录因子c-Jun通过对β3GnT8的调控作用发挥对肝癌细胞侵袭、迁移调控的作用机制。方法:(1)培养三种人肝癌细胞株SK-Hep-1、SMMC7721、HepG2,Real time PCR及Western blot检测c-jun和β3GnT8的表达;(2)染色质免疫共沉淀(ChIP)检测转录因子c-Jun与β3GnT8启动子区相互结合;(3)c-jun正义载体及空载体和c-jun干扰载体及空载体分别通过脂质体转染c-Jun低表达细胞株SK-Hep-1和c-Jun高表达细胞株HepG2,荧光显微镜观察转染效率;(4)Real time PCR及Western blot检测转染后SK-Hep-1和HepG2 c-jun、β3GnT8、CD147以及一些相关分子的表达变化;(5)Lectin blot检测转染后多聚乳糖胺表达变化;(6)Transwell检测转染后SK-Hep-1和HepG2细胞侵袭、迁移能力变化;(7)划痕损伤修复实验检测转染后SK-Hep-1和HepG2细胞迁移能力变化;(8)低表达β3GnT8 SK-Hep-1与SMMC7721构建上调β3GnT8稳转细胞株;(9)c-jun干扰载体及空载体分别通过脂质体转染SK-Hep-1与SMMC7721上调β3GnT8稳转细胞株,Western blot检测转染后SK-Hep-1和SMMC7721 c-Jun、β3GnT8、CD147表达变化,Lectin blot检测细胞多聚乳糖胺表达变化,Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力变化。结果:(1)三种肝癌细胞中HepG2的c-Jun表达量最高,其次为SMMC7721,SK-Hep-1的c-Jun表达最低;β3GnT8在HepG2中表达最高,SK-Hep-1中表达适中,SMMC7721表达最低;(2)ChIP结果显示,SK-Hep-1和HepG2细胞中转录因子c-Jun结合到β3GnT8 DNA启动子区;(3)Real time PCR及Western blot检测发现,与对照组相比,SK-Hep-1细胞上调c-jun后,细胞β3GnT8 mRNA及蛋白表达升高,GNTⅤ蛋白表达升高,HG-CD147蛋白表达升高,MMP14 mRNA表达升高,TIMP2蛋白表达降低;与对照组相比,HepG2细胞干扰c-jun后,细胞β3GnT8mRNA及蛋白表达下降,GNTⅤ蛋白表达下降,CD147 mRNA及HG-CD147蛋白表达下降,MMPs mRNA表达下降,TIMP2蛋白表达升高;(4)Lectin blot结果显示,与对照组相比,SK-Hep-1细胞上调c-jun后,细胞多聚乳糖胺表达升高;与对照组相比,HepG2细胞干扰c-jun后,细胞多聚乳糖胺表达下降;(5)Transwell及细胞划痕损伤修复实验表明,与对照组相比,SK-Hep-1细胞上调c-jun后,细胞侵袭、迁移能力上升;HepG2细胞干扰c-jun后,细胞侵袭、迁移能力下降;(6)Western blot检测SK-Hep-1与SMMC7721β3GnT8稳转细胞株蛋白表达,与对照组相比,β3GnT8表达显著升高,HG-CD147表达升高,Lectin blot实验表明,细胞多聚乳糖胺表达显著升高,Transwell实验表明,细胞侵袭迁移能力上升;Western blot检测SK-Hep-1与SMMC7721β3GnT8稳转细胞株转染c-jun干扰载体后蛋白表达,与稳转细胞株相比,β3GnT8表达下降,HG-CD147表达下降,Lectin blot实验表明,细胞多聚乳糖胺表达下降,Transwell实验表明,细胞侵袭迁移能力下降。结论:(1)β3GnT8可通过改变多聚乳糖胺的表达和糖蛋白CD147糖基化水平影响细胞功能,在肝癌细胞侵袭、迁移过程中发挥重要作用,过表达β3GnT8可提高肝癌细胞侵袭、迁移能力。(2)c-Jun作为转录因子在SK-Hep-1和HepG2细胞中调控β3GnT8的表达,该作用可能是c-Jun调控肝癌细胞侵袭、迁移能力的机制之一。
【关键词】：β3GnT8 侵袭迁移 CD147 多聚乳糖胺 转录因子c-Jun 肝癌
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-25
• 参考文献17-25
• 1.引言25-26
• 2.材料与方法26-41
• 3.实验结果41-59
• 4.讨论59-63
• 参考文献63-66
• 全文总结66-67
• 综述：肝癌中转录因子c-Jun的作用研究67-75
• 参考文献71-75
• 攻读学位期间本人出版或公开发表的论文75-76
• 受资助的基金项目76-77
• 附录Ⅰ 中英文缩略词表77-79
• 致谢79-80

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本文编号：483798