GSK-3β对TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的影响及作用机制的研究

发布时间：2017-06-27 20:09

  本文关键词：GSK-3β对TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的影响及作用机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:1)验证抑制GSK-3β的表达后可影响肝癌细胞的生长。2)探讨抑制GSK-3β的表达对TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡的影响及作用机制。方法:分别构建慢病毒载体携带sh GSK-3β(shGSK-3β)以及腺病毒载体携带TRAIL(Ad5.TRAIL)。将Hep G2细胞随机分为三组:空白对照组,sh RNA处理组,sh GSK-3β处理组。分别利用定量PCR和Western Blot技术检测GSK-3β在三组细胞中的m RNA水平和蛋白质水平,并用MTT技术检测细胞的活性。将Hu H-7细胞分为四组:空白对照组,GSK-3β抑制剂处理组,Ad5.TRAIL处理组,两者混合处理组。分别用流式细胞术检测四组细胞的凋亡情况。此外,抑制GSK-3β的表达后,用Western blot技术分别检测NF-κB通路的下游蛋白Bcl-x L和c IAP2的表达。将Hu H-7细胞随机分为五组:a)空白对照组,b)Ad5.TRAIL和sh Bcl-x L处理组,c)Ad5.TRAIL和shc IAP2处理组,d)Ad5.TRAIL,sh Bcl-x L和GSK-3β抑制剂处理组,e)Ad5.TRAIL,shc IAP2和GSK-3β抑制剂处理组,用流式细胞术分别检测五组细胞的凋亡情况。结果:1)与对照组相比,sh GSK-3β明显下调了GSK-3β在Hep G2细胞系中的表达(P0.05),并且有效抑制了Hep G2细胞的生长(P0.05)。2)加入GSK-3β抑制剂后明显增强了Ad5.TRAIL诱导的Hu H-7细胞的凋亡作用(P0.05)。加入GSK-3β抑制剂减少了Bcl-x L和c IAP2的表达(P0.05),且下调Bcl-x L和c IAP2表达后,d组的凋亡明显高于其他四组(P0.05)。结论:1)抑制GSK-3β的表达可抑制肝癌细胞的增殖。2)抑制GSK-3β的表达可增强TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡,并且可通过NF-κB通路介导。
【关键词】：GSK-3β 凋亡 TRAIL NF-κB 肝癌
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-5
• 引言5-7
• 第1章 材料与方法7-14
• 1.1 实验材料7-8
• 1.1.1 实验对象7
• 1.1.2 实验试剂7
• 1.1.3 实验主要仪器7-8
• 1.2 实验方法8-13
• 1.2.1 细胞培养和感染8-9
• 1.2.2 细胞增殖检测9-10
• 1.2.3 实时定量PCR10-11
• 1.2.4 Western Blot检测蛋白表达11-12
• 1.2.5 流式细胞术12-13
• 1.3 统计分析13-14
• 第2章 结果14-20
• 2.1 GSK-3β 下调抑制肝癌细胞的增殖14-15
• 2.2 GSK-3β 抑制剂增强TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡15-17
• 2.3 GSK-3β 调节NF-κ B下游蛋白17-18
• 2.4 下调Bcl-xL增强GSK-3β 抑制剂对TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡18-20
• 第3章 讨论20-22
• 结论22-23
• 参考文献23-26
• 综述 GSK-3β对肿瘤细胞生长和凋亡调控机制的研究进展26-41
• 综述参考文献34-41
• 攻读学位期间的研究成果41-42
• 致谢42-43

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