环状RNA CDR1as调控胶质瘤恶性生长的分子机制

发布时间：2017-07-04 12:21

  本文关键词：环状RNA CDR1as调控胶质瘤恶性生长的分子机制

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【摘要】：目的:神经胶质瘤是最为常见的原发性颅内肿瘤,发病率为(5~8)/100万,5年病死率在全身肿瘤中仅次于胰腺癌和肺癌,位列第三位,是严重危害人类健康的重大疾病之一。目前,胶质瘤的治疗以手术治疗为主,但由于肿瘤浸润性生长,与脑组织间无明显边界,难以作到全部切除,常遗有神经功能缺失。国内外有关脑胶质瘤的临床治疗效果在近30年进展最为缓慢,患者生存期无明显改善。恶性胶质瘤的发病机制至今仍不明确。因此,对恶性胶质瘤的分子机制进行深入研究,从而发现更为有效的治疗靶标和治疗方案,就显得十分迫切和必要。环状RNAs(circular RNA)作为一类新发现的非编码RNA分子,可能对细胞生物学行为发挥着重要的调节作用。最新的研究显示,环状RNAs可大量表达于肿瘤细胞中,而它们的表达异常是否与肿瘤的发生发展相关,尚待进一步的研究。本研究旨在通过敲减实验阐明环状RNA CDR1as调控胶质瘤恶性生长的作用机制,为该疾病的有效防治提供新策略。方法:1、根据Circbase数据库提供的CDR1as基因序列设计合成特异引物,利用RT-qPCR检测胶质瘤细胞系中CDR1as的表达水平。2、构建CDR1as敲减载体。3、MTT检测CDR1as对胶质瘤细胞增殖的影响。4、流式细胞术检测CDR1as对胶质瘤细胞凋亡及周期的影响。5、敲减处理胶质瘤细胞系,RT-qPCR检测CDR1as的表达,同时用RT-qPCR及Western Blot检测CDR1as下游靶标P53的变化。结果:1、RT-qPCR检测发现与正常脑组织相比,胶质瘤细胞系及胶质瘤组织中CDR1as的表达显著降低。2、利用CDR1as敲减载体处理胶质瘤细胞48h后,MTT检测细胞增殖,与对照组相比,处理组细胞增殖能力明显升高。3、利用CDR1as敲减载体处理胶质瘤细胞48h后,用流式细胞术检测细胞凋亡及周期,发现与对照组相比,处理组细胞凋亡减少,细胞周期G0/G1期降低,且S期明显升高。4、利用CDR1as敲减载体处理胶质瘤细胞系后,CDR1as及P53的表达明显降低。结论:环状RNA CDR1as在多数恶性胶质瘤肿瘤标本和细胞失活,CDR1as的失活可能通过降低p53的表达从而促进胶质瘤细胞的恶性生长。
【关键词】：胶质瘤 环状 RNA CDR1as 肿瘤蛋白p53
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.4
【目录】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• （一）前言11-12
• （二）材料和方法12-17
• 1. 材料与仪器12-14
• 1.1 主要试剂12
• 1.2 组织收集12-13
• 1.3 细胞株及细胞培养13
• 1.4 主要仪器与设备13
• 1.5 主要溶液的配制13-14
• 2. 方法14-17
• 2.1 细胞培养传代和收集14-15
• 2.2 实时荧光定量PCR检测CDR1as的表达15-16
• 2.3 细胞转染16
• 2.4 MTT法检测细胞增殖能力16
• 2.5 流式细胞术16
• 2.6 蛋白质印迹实验（Western blotting）16-17
• 2.7 统计学方法17
• （三）结果17-19
• （四）讨论19-21
• （五）结论21-22
• （六）参考文献22-25
• 综述25-41
• 参考文献34-41
• 致谢41-42

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本文编号：517781