Let-7b及其靶基因编码蛋白在桥本氏病伴发甲状腺乳头状癌中的作用

发布时间：2017-08-25 08:46

  本文关键词：Let-7b及其靶基因编码蛋白在桥本氏病伴发甲状腺乳头状癌中的作用

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【摘要】：目前为止,许多研究发现桥本氏甲状腺炎患者发生甲状腺乳头状癌危险性较正常人群明显增高,免疫以及炎症反应被发现在其中扮演着一定的作用,但是基因以及蛋白层面上的具体机制仍需要进一步深入研究。Let-7b为miRNAs其中Let-7家族中的一员,已经被许多研究发现与肿瘤的发生、进展及淋巴结转移有关,且其在免疫及炎症反应中的作用也被许多文献报道,但是其在甲状腺乳头状癌合并桥本氏甲状腺炎的发生中的作用仍未有研究报导,本课题即针对此方面进行深入研究探讨。目的检测Let-7b及其靶基因编码蛋白在HT合并PTC患者、单纯PTC患者及结节性甲状腺肿患者组织中的表达,并探讨这些因子对HT伴发PTC的影响方法收集HT合并PTC患者、单纯PTC患者及结节性甲状腺肿患者的新鲜组织并从中提取microRNAs。应用实时荧光定量PCR技术检测PTC合并HT患者、单纯PTC患者癌组织以及结节性甲状腺肿患者病变组织中Let-7b的表达水平,并应用western blot技术对其中的CCR7、CCL7水平进行测定,进一步应用免疫组织化学染色法检测CCR7、CCL7及PTAFR在单纯HT患者、HT合并PTC、单纯PTC以及结节性甲状腺肿患者组织中的表达情况。收集所有检测标本的甲状腺功能指标以及病理结果。应用单因素方差分析方法比较Let-7b、CCR7、CCL7、PTAFR在三组组织中的表达,应用相关分析方法探索组织中Let-7b、CCR7、CCL7、PTAFR的表达与患者临床指标的相关性。结果①Let-7b在HT合并PTC患者以及单纯PTC患者中表达较结节性甲状腺肿患者表达明显下调,经计算ΔΔCt=ΔCtPTC组-ΔCt结甲组=1.25,ΔΔCt=ΔCtPTC合并HT组-ΔCt结甲组=2.02,提示PTC组的组织中Let-7b基因转录表达估值为结甲组的2-ΔΔCt=0.61倍,PTC合并HT组的组织中Let-7b基因转录表达估值为结甲组的2-ΔΔCt=0.38倍。Let-7b在HT合并PTC患者中表达较单纯PTC患者表达也下调,ΔΔCt=ΔCtPTC合并HT组-ΔCtPTC组=0.77,提示PTC合并HT组的组织中Let-7b基因转录表达估值为单纯PTC组的2-ΔΔCt=0.62倍,但差异无统计学意义。②CCR7主要表达于细胞的胞浆以及胞膜,其在HT合并PTC患者、单纯PTC患者以及结节性甲状腺肿者中的表达量逐渐递减。其表达量与患者的FT3有关(r=0.399,P0.05)。③CCL7也主要表达于细胞的胞浆以及胞膜,在HT合并PTC患者、单纯PTC患者以及结节性甲状腺肿者中的表达量也逐渐递减。其表达量与淋巴结转移相关(r=0.573,P0.01)④PTAFR也主要表达于细胞的胞浆以及胞膜,其在肿瘤组织、单纯HT患者病理组织以及结节性甲状腺肿者病理组织中的表达量逐渐递减,其在PTC合并HT组织中的表达较在单纯PTC组织中的表达阳性率相当,但着色强度弱。结论Let-7b的低表达在HT合并PTC的发病过程中发挥一定的促进作用,并且此作用可能是通过调控靶基因编码蛋白CCR7、CCL7以及PTAFR的表达情况来实现的。
【关键词】：Let-7b 桥本氏甲状腺炎 甲状腺乳头状癌
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R736.1
【目录】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第一章 材料与方法9-18
• 1.1 仪器、试剂和耗材9-10
• 1.1.1 主要仪器9
• 1.1.2 主要试剂和耗材9-10
• 1.2. 实验方法10-17
• 1.2.1 RNA的提取10-11
• 1.2.2 RNA的逆转录11-12
• 1.2.3 实时荧光定量PCR反应12
• 1.2.4 免疫组织化学染色（ICH）12-14
• 1.2.5 Western Blot14-17
• 1.3.资料收集17
• 1.4 统计学方法17-18
• 第二章 实验结果18-24
• 2.1 荧光定量PCR检测Let-7b基因的转录表达18-20
• 2.1.1 提取RNA组织患者的一般情况18
• 2.1.2 各组患者病理组织中Let-7b基因的转录表达18-20
• 2.2 Western Blot检测CCR7、CCL7分子的表达20-21
• 2.3 免疫组化检测CCR7、CCL7、PTAFR分子的表达21-24
• 2.3.1 患者一般临床资料21-22
• 2.3.2 CCR7在四组组织中的表达22
• 2.3.3 CCL7在三组组织中的表达22
• 2.3.4 PTAFR在三组组织中的表达22-24
• 第三章 讨论24-28
• 结论28-29
• 参考文献29-32
• 综述32-47
• 综述参考文献39-47
• 攻读学位期间研究成果47-48
• 致谢48-49

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本文编号：736143