PRMT2对MCF-7细胞侵袭与迁移的影响及机制研究

发布时间：2017-08-25 21:28

  本文关键词：PRMT2对MCF-7细胞侵袭与迁移的影响及机制研究

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【摘要】：目的:明确蛋白精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭与迁移的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法:1.观察PRMT2稳定过表达后的人乳腺癌MCF-7细胞的形态学改变,Transwell体外侵袭及划痕损伤实验观察PRMT2过表达对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭及转移能力的影响。2.蛋白质免疫印迹(western blot,WB)分别检测PRMT2稳定过表达及PRMT2稳定低表达的人乳腺癌MCF-7细胞中上皮组织间充质化(EMT)相关蛋白的表达,细胞免疫荧光技术观察PRMT2过表达的人乳腺癌MCF-7细胞中表皮钙粘素(E-cadherin)胞内表达及定位改变;3.采用高通量抗体芯片技术对PRMT2过表达的人乳腺癌MCF-7细胞进行肿瘤信号通路关键位点蛋白检测,WB进行分子机制的初步研究。结果:1.形态学观测、Transwell体外侵袭及划痕损伤实验表示:PRMT2稳定过表达促进人乳腺癌细胞MCF-7出现EMT样形态学改变,促进MCF-7发生体外侵袭转移。2.WB检测结果表示:PRMT2稳定过表达减少E-cadherin的表达,增加Slug的表达;而PRMT2稳定低表达则促进E-cadherin的表达,抑制Slug的表达;细胞免疫荧光结果显示:PRMT2稳定过表达后E-cadherin表达减少,但未见定位改变。3.抗体芯片检测结果提示:PRMT2降低β-catenin的磷酸化水平,WB检测结果表示,APC-Axin-GSK-3β复合物蛋白表达减少,β-catenin核定位增加。结论:1.PRMT2增加MCF-7细胞体外侵袭与迁移能力。2.PRMT2可能通过调节β-catenin磷酸化激活Wnt信号通路促进MCF-7细胞发生侵袭迁移。
【关键词】：蛋白精氨酸甲基转移酶2(PRMT2) 人乳腺癌MCF-7细胞 上皮组织间充质化(EMT) Wnt信号通路
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略词表11-13
• 第1章 前言13-15
• 第2章 实验材料15-21
• 2.1 细胞株15
• 2.2 培养基于血清15
• 2.3 主要药品、试剂和试剂盒15-16
• 2.4 主要试剂配制16-18
• 2.4.1 细胞培养基16
• 2.4.2 western blot试剂配制16-18
• 2.5 主要仪器和设备18-21
• 第3章 实验方法21-29
• 3.1 细胞培养及处理21-22
• 3.2 Transwell体外侵袭实验22-23
• 3.3 划痕损伤实验23
• 3.4 Western blot23-25
• 3.4.1 蛋白样品的抽提23-24
• 3.4.1.1 全细胞蛋白的抽提23-24
• 3.4.1.2 胞质与胞核蛋白的抽提24
• 3.4.2 BCA定量24
• 3.4.3 电泳和转膜24-25
• 3.4.4 封闭和抗体孵育25
• 3.4.5 显影25
• 3.5 细胞免疫荧光25-26
• 3.6 抗体芯片检测26-28
• 3.6.1 样品蛋白质抽提与标记26-27
• 3.6.1.1 蛋白质抽提26
• 3.6.1.2 蛋白质浓度测定26
• 3.6.1.3 蛋白质标记26-27
• 3.6.2 芯片杂交27-28
• 3.6.2.1 芯片封闭27
• 3.6.2.2 芯片杂交27
• 3.6.2.3 芯片检测27-28
• 3.6.3 芯片结果扫描28
• 3.6.4 芯片数据整理及报告分析28
• 3.7 数据分析28-29
• 第4章 实验结果29-40
• 4.1 PRMT2增加MCF29-31
• 4.1.1 PRMT2过表达促进MCF-7 细胞产生类似EMT现象的形态学改变29
• 4.1.2 PRMT2过表达促进MCF29-31
• 4.1.2.1 PRMT2过表达促进MCF29-31
• 4.1.2.2 PRMT2过表达促进MCF31
• 4.2 PRMT2可上调MCF31-35
• 4.3 PRMT2可能通过调节 β-catenin磷酸化激活Wnt信号通路促进MCF35-40
• 4.3.1 抗体芯片检测MCF-7 细胞中PRMT2调控的肿瘤信号通路35-37
• 4.3.2 蛋白质印迹验证Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达37-40
• 4.3.2.1 WB检测MCF-7 全细胞蛋白 β-catenin与p-β-catenin的表达37-38
• 4.3.2.2 WB检测MCF-7 细胞胞质与胞核蛋白Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达38-40
• 第5章 讨论40-43
• 第6章 实验结论43-44
• 参考文献44-49
• 综述49-58
• 参考文献55-58
• 附录58-59
• 攻读学位期间的科研成果59-61
• 致谢61-62

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本文编号：738299