RNA干扰SMYD3基因对人食管鳞癌细胞组蛋白3赖氨酸4三甲基化影响

发布时间：2017-09-04 14:04

  本文关键词：RNA干扰SMYD3基因对人食管鳞癌细胞组蛋白3赖氨酸4三甲基化影响

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【摘要】：目的:观察H3K4三甲基化在人食管鳞癌组织以及相应癌旁组织的水平,比较二者之间的差异;检验SMYD3-si RNA下调食管鳞癌细胞SMYD3表达的效应;探讨下调SMYD3基因表达对食管鳞癌细胞中H3K4三甲基化状态改变的影响。方法:1、选取14例人食管鳞癌组织及相应的食管癌旁组织,提取组蛋白,采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay简称ELISA)方法,观察H3K4三甲基化的水平。2、合成下调SMYD3的3组si RNA(si RNA-440,si RNA-926,si RNA-1232)及阴性对照、阳性对照,分别转染入人食管鳞癌TE13细胞,用荧光定量PCR、Western blot技术,从m RNA水平和蛋白水平分别检测转染si RNA后人食管鳞癌TE13细胞SMYD3,筛选出干扰效果最好的si RNA;转染SMYD3-si RNA后,运用ELISA方法检测人食管鳞癌TE13细胞H3K4三甲基化水平的变化。结果:1、在14例食管癌旁组织及癌组织中,癌组织中SMYD3蛋白的H3K4三甲基化水平高于食管癌旁组织,差异具有统计学意义(p0.05)。2、以空白对照组及阴性对照组为对照,食管鳞癌TE13细胞转染SMYD3-si RNA后,SMYD3的m RNA和蛋白表达水平均明显下降,其中SMYD3-si RNA-936干扰效果最好(p0.05);转染SMYD3-si RNA-936后,食管鳞癌TE13细胞的H3K4三甲基化水平较阴性对照组和空白对照组有明显下降(p0.05);而阴性对照组和空白对照组之间的差异无统计学意义(p0.05)。结论:1、H3K4三甲基化在食管鳞癌组及相应食管癌旁组织当中均存在,提示H3K4三甲基化可能参与细胞的正常生理活动;但在人食管鳞癌组织中水平明显高于相应正常食管组织,提示食管鳞癌的发生与H3K4三甲基化增高有密切关系。从而,明确进一步研究H3K4甲基化转移酶SMYD3基因在食管鳞癌发生发展中作用及机理的意义。2、应用siRNA技术高效下调食管鳞癌TE13细胞SMYD3基因的表达,筛选出干扰效果最强的si RNA;通过si RNA技术下调SMYD3基因的表达可以导致食管鳞癌TE13细胞中H3K4三甲基化下调,证明食管鳞癌中SMYD3可能通过作用于组蛋白H3K4三甲基化,进而调节其他基因的表达。为食管鳞癌的基因治疗研究打下了实验基础,同时提示SMYD3基因可能作为食管鳞癌基因治疗的一个靶点。
【关键词】：SMYD3 食管癌 RNA干扰 H3K4三甲基化 表观遗传学
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-14
• 一、人类食管鳞癌组织中H3K4三甲基化水平及意义14-21
• 1.1 材料和方法14-16
• 1.1.1 临床资料14
• 1.1.2 主要试剂14
• 1.1.3 主要仪器设备14-15
• 1.1.4 实验方法15-16
• 1.1.5 统计学方法16
• 1.2 结果16-18
• 1.2.1 H3K4三甲基化在人类食管鳞癌表达高于正常组织16-18
• 1.3 讨论18-20
• 1.3.1 食管癌的现状18
• 1.3.2 组蛋白甲基化修饰意义18-20
• 1.3.3 H3K4三甲基化水平的增高在食管鳞癌中的作用20
• 1.4 小结20-21
• 二、RNA干扰食管癌细胞SMYD3基因表达对H3K4me3的影响21-51
• 2.1 材料和方法21-39
• 2.1.1 实验对象21
• 2.1.2 主要试剂21-23
• 2.1.3 试剂的配制23-27
• 2.1.4 主要仪器设备27-28
• 2.1.5 实验方法28-39
• 2.1.6 统计学方法39
• 2.2 结果39-43
• 2.2.1 SMYD3 siRNA转染后对SMYD3mRNA表达的影响39-41
• 2.2.2 SMYD3 siRNA转染后对SMYD3蛋白表达的影响41-42
• 2.2.3 SMYD3 siRNA转染后对TE13细胞H3K4三甲基化水平的影响42-43
• 2.3 讨论43-50
• 2.3.1 SMYD3结构和功能43-45
• 2.3.2 RNA干扰（RNAi）技术的原理及特点45-46
• 2.3.3 siRNA的设计、制备和转染46-47
• 2.3.4 RNA干扰技术的应用47-48
• 2.3.5 实时荧光定量PCR技术48
• 2.3.6 Western blot技术48-49
• 2.3.7 SMYD3与H3K4me3之间相互作用49-50
• 2.4 小结50-51
• 结论51-52
• 参考文献52-58
• 综述 组蛋白甲基化酶SMYD3研究进展58-75
• 综述参考文献69-75
• 致谢75

【共引文献】

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本文编号：791948