IRF8对弥漫性大B细胞淋巴瘤的生长调控研究

发布时间：2017-09-06 11:50

  本文关键词：IRF8对弥漫性大B细胞淋巴瘤的生长调控研究

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【摘要】：目的弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是成年人中最常见的淋巴系统恶性肿瘤。DLBCL的高度异质性给临床治疗及预后带来挑战,因此研究DLBCL的分子病理对于DLBCL的个性化治疗具有重要的临床意义。干扰素调节因子8(interferon regulator factor 8,IRF8)对B细胞的生长发育有重要调节作用,但IRF8在DLBCL中的功能尚不明确。在我们的前期工作中,通过对数据库的分析发现IRF8的mRNA表达水平和DLBCL病人的生存时间呈显著负相关,所以本研究旨在进一步探索IRF8对DLBCL的影响,并深入研究其分子机制,希望为IRF8的临床应用提供更多的理论依据。方法用分子克隆技术构建IRF8特异性的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒和阴性对照质粒,通过慢病毒系统包装到293T细胞中,收集病毒液感染DLBCL细胞(OCI-Ly01和OCI-Ly10),筛选出抗puromysin的DLBCL细胞株,用实时定量聚合酶连锁反应(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot方法分别检测IRF8转录水平和蛋白表达水平;用MTS检测细胞生长,用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein succinimidyl amino ester,CFSE)检测细胞分裂,研究IRF8对DLBCL细胞增殖的影响;用Western blot方法检测丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)磷酸化水平,探索IRF8对DLBCL细胞增殖的影响机制;用裸鼠成瘤实验研究IRF8对DLBCL细胞在体肿瘤生长的影响,Western blot方法检测裸鼠肿瘤组织IRF8的表达水平和p38 MAPK及细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)MAPK的磷酸化水平;通过免疫组化实验检测DLBCL病人组织的IRF8表达水平,分析IRF8表达水平和DLBCL病人分子亚型的关系。结果IRF8减低表达可抑制DLBCL细胞增殖,降低DLBCL细胞p38和ERK MAPK的磷酸化水平,抑制DLBCL细胞在体肿瘤的生长,并且IRF8的表达水平和DLBCL病人的分子亚型有显著相关性,生发中心B细胞样(germinal centre B-cell-like,GCB)亚型的DLBCL病人的IRF8表达水平较低,而非生发中心B细胞样(non germinal centre B-celllike,non-GCB)亚型的DLBCL病人的IRF8表达水平较高。结论体外及动物在体实验均证明,IRF8可通过调节p38和ERK MAPK的磷酸化水平而抑制DLBCL生长。IRF8可能通过促进细胞增殖在DLBCL的发病过程中发挥致癌基因的作用,从而影响DLBCL病人的预后。
【关键词】：弥漫性大B细胞淋巴瘤 干扰素调节因子8 增殖 丝裂原活化蛋白激酶
【学位授予单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.1
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-12
• 1 研究内容和技术路线12-14
• 1.1 研究内容12-13
• 1.1.1 构建IRF8低表达的DLBCL细胞株12
• 1.1.2 研究减低IRF8表达对DLBCL细胞增殖的影响12
• 1.1.3 探索IRF8影响DLBCL细胞增殖的机制12
• 1.1.4 研究减低IRF8表达对DLBCL细胞在体肿瘤生长的影响12
• 1.1.5 研究IRF8表达水平和DLBCL分子分型的关系12-13
• 1.2 技术路线13-14
• 2 实验材料与方法14-27
• 2.1 实验材料14-18
• 2.1.1 主要设备仪器14-15
• 2.1.2 主要试剂及配制15-18
• 2.2 实验方法18-27
• 2.2.1 细胞培养18-20
• 2.2.2 构建IRF8低表达的DLBCL细胞株20-21
• 2.2.3 RNA提取21-22
• 2.2.4 荧光定量PCR22-23
• 2.2.5 蛋白免疫印迹23
• 2.2.6 检测细胞生长23-24
• 2.2.7 检测细胞分裂24
• 2.2.8 检测细胞周期24
• 2.2.9 动物体内成瘤24
• 2.2.10 免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）24-26
• 2.2.11 统计分析26-27
• 3 实验结果27-37
• 3.1 减低IRF8表达抑制DLBCL细胞增殖27-30
• 3.2 减低IRF8表达抑制DLBCL细胞p38和ERK的磷酸化30-32
• 3.3 减低IRF8表达抑制DLBCL在体肿瘤生长32-34
• 3.4 IRF8表达水平和DLBCL分子分型相关34-37
• 4 讨论37-39
• 5 总结39-40
• 参考文献40-42
• 附录A 缩略词42-44
• 在学研究成果44-45
• 致谢45

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本文编号：802975