PRMT2在乳腺癌细胞tamoxifen耐药性中的作用初步研究

发布时间：2017-09-06 12:14

  本文关键词：PRMT2在乳腺癌细胞tamoxifen耐药性中的作用初步研究

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【摘要】：目的:研究PRMT2对乳腺癌细胞TAM耐药产生的影响,并对其机制进行初步探讨,为耐药性乳腺癌的治疗提供新思路。方法:以体外培养的MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞为研究对象,研究PRMT2在TAM诱导乳腺癌细胞凋亡过程中的作用及其相关机制。实验包括3部分(1)通过流式细胞术,从细胞水平检测TAM对乳腺癌细胞凋亡的影响;(2)通过激光共聚焦技术明确PRMT2及ER-ɑ36的亚细胞定位;(3)利用蛋白质免疫印迹法,从蛋白水平分析TAM对乳腺癌细胞PRMT2、ER-ɑ36及P-Akt表达的影响。结果:1.流式细胞术结果显示:MCF-7细胞株经不同浓度TAM处理4小时后,与对照组相比,2μM、5μM、7.5μM药物处理组细胞的凋亡率明显增加,且TAM具有剂量依赖性的促细胞凋亡效应,有统计学意义(P0.001)。然而,在相同药物浓度作用下,MDA-MB-231细胞的凋亡率要明显低于MCF-7细胞,说明MDA-MB-231细胞对TAM相对耐药。2.免疫荧光、激光共聚焦结果显示:在MDA-MB-231乳腺癌细胞中,PRMT2及ER-ɑ36的亚细胞定位在细胞核及细胞质中,表明PRMT2和ER-ɑ36在该细胞系中存在共定位。3.WB结果显示,在对TAM相对敏感的MCF-7细胞株中,不同浓度TAM(0μM、2μM、5μM、7.5μM)处理细胞4小时后,P-Akt表达水平明显下调,且呈剂量依赖性,而此细胞株中PRMT2及ER-ɑ36的表达水平无明显变化;然而,在对TAM相对耐药的MDA-MB-231细胞株中,PRMT2的表达水平下调,伴随着ER-ɑ36与P-Akt表达水平明显上调,三者变化都具有剂量依赖性特点。进一步利用两种乳腺癌细胞进行TAM时效研究,结果与各自TAM量效处理组相一致。结论:1.PRMT2与ER-α36在乳腺癌MDA-MB-231细胞中存在共定位。2.在MDA-MB-231细胞中,PRMT2可能参与TAM耐药,机制与TAM下调PRMT2表达,提高ER-ɑ36表达及Akt磷酸化水平有关。
【关键词】：蛋白质精氨酸甲基转移酶2 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路 乳腺癌细胞 他莫昔芬耐药 雌激素受体-ɑ36
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 实验材料14-20
• 2.1 细胞株14
• 2.2 质粒构建14
• 2.3 主要试剂、耗材及来源14-15
• 2.4 主要溶液配制15-18
• 2.5 主要仪器18-20
• 第3章 实验方法20-26
• 3.1 细胞培养20
• 3.2 流式细胞术20-21
• 3.3 激光共聚焦显微镜21-22
• 3.4 蛋白质免疫印迹22-25
• 3.5 统计学处理25-26
• 第4章 实验结果26-32
• 4.1 TAM对乳腺癌细胞凋亡的影响26-28
• 4.2 PRMT2及ER-ɑ36在MDA-MB-231细胞中的亚细胞定位28
• 4.3 TAM对乳腺癌细胞PRMT2、ER-ɑ36及P-Akt表达的影响28-32
• 第5章 讨论32-36
• 第6章 结论36-38
• 参考文献38-44
• 综述44-54
• 参考文献51-54
• 硕士期间发表的论文54-56
• 论文资助情况56-58
• 致谢58

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本文编号：803062