宣威肺腺癌干细胞生物学特性的鉴定

发布时间：2017-09-06 19:13

  本文关键词：宣威肺腺癌干细胞生物学特性的鉴定

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【摘要】：[目的]对前期流式细胞术分选并克隆化培养的SPs细胞进行肺腺癌干细胞生物学特性的鉴定,同时观察细胞形态与“干性”之间有无关系。[方法]将前期分选出并克隆化培养的细胞亚群分组：血清培养的细胞中SPs组包括长梭形的SPs-C11细胞与不规则多边形的SPs-E8细胞;SPcm组包括不规则多边形的SPcm-G10细胞与长梭形的SPcm-B10细胞。SPs-E8-tu为无血清组。对SPs亚群细胞进行肺腺癌干细胞生物学特性的鉴定,分为体外、体内实验两部分进行。体外实验包括：1.采用流式细胞术检测干细胞相关蛋白分子,了解“干性”蛋白表达情况；2.采用流式细胞术检测各型细胞对BrdU的潴留能力,了解其分裂方式；3.采用免疫荧光法检测肺干细胞蛋白SCGB1A1、proSP-C的表达情况。体内实验包括：4.检测各型细胞对免疫缺陷小鼠的致瘤能力,以呈浓度梯度的细胞量接种于NOD/SCID小鼠皮下,观察成瘤情况及致瘤的最小细胞数。5、SPSS17.0统计软件进行数据分析。[结果]1.将细胞用荧光素标记的抗体染色后,经流式细胞术检测分析,血清培养的两组细胞间各分子的表达情况均有不同,SPs-C11在Nanog, hTERT, CD34, CD221水平的表达明显高于SPcm-B10细胞,两两比较均有显著性差异,P0.01。SPs-E8在hTERT, CD221水平的表达明显高于SPcm-G10, P0.01;但在其余2种蛋白的表达上无显著性差异,P0.05。2. BrdU实验：两组血清培养的细胞亚群中,SPs与SPcm细胞均为阴性表达。3.免疫荧光实验：在血清培养条件下,SPs-C11细胞肺干细胞分子标记SCGB1A1、proSP-C的表达高于SPcm-B10,但 SPs-E8、SPcm-G10均为阴性表达；而无血清培养的SPs-E8-tu细胞表达的比例与强度又较血清培养下的SPs-C11明显增高。4.裸鼠成瘤实验：血清培养的两组细胞分别以1×107、2×107接种,SPs-C11与SPcm-B10的最小致瘤量均为1×107,但SPs-C11形成的肿瘤大于SPcm-B10;无血清培养的SPs-E8-tu细胞则以0.5×106接种,形成17×12×8mm3的巨大肿瘤组织。观察至12周,除SPs-E8和SPcm-G10未能在接种部位出现包块外,其余细胞均成功致瘤。处死小鼠取瘤,发现肿瘤形状不规则,呈结节样。病理显示为肺腺癌。[结论]1.SPs细胞较SPcm细胞保留了较多的干细胞生物学特性,尤其是长梭形的SPs-C11亚群细胞,其高表达干细胞相关蛋白Nanog、hTERT、CD34、CD221;但随着传代次数的增加,血清培养条件下SPs与SPcm均不同程度发生分化。2.细胞形态与“干性”无关。3.无血清培养条件较血清培养可较好的维持肺腺癌干细胞生物学特征。4.筛选到一株富含宣威肺腺癌干细胞的细胞亚群SPs-E8-tu。
【关键词】：肿瘤干细胞 宣威肺腺癌 分子标志物 异种移植致瘤性
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 英文缩略语表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-14
• 实验材料14-18
• 实验方法18-25
• 结果25-34
• 讨论34-41
• 结论41-42
• 参考文献42-46
• 综述146-50
• 参考文献48-50
• 综述250-60
• 参考文献56-60
• 硕士期间发表的文章60-61
• 致谢61

【参考文献】

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1 AN Songzhu Michael;DING Qiang;ZHANG Jie;XIE JingYi;LI LingSong;;Targeting stem cell signaling pathways for drug discovery:advances in the Notch and Wnt pathways[J];Science China(Life Sciences);2014年06期

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本文编号：804936