α2，3唾液酸转移酶Ⅲ调节卵巢癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

发布时间：2017-09-12 02:14

  本文关键词：α2，3唾液酸转移酶Ⅲ调节卵巢癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

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【摘要】：研究目的本课题研究α2,3唾液酸转移酶III(ST3Gal-Ⅲ)在卵巢癌株对紫杉醇敏感性中的作用,探讨二者对肿瘤细胞杀伤的协同效应,为临床治疗复发性和耐药性卵巢癌提供新的思路。研究方法1.了解ST3Gal-Ⅲ在卵巢癌细胞株SKOV3和HO8910PM中的表达差异:q RT-PCR检测HO8910PM、SKOV3细胞株ST3Gal-Ⅲ的基因表达水平,流式细胞术检测在ST3Gal-Ⅲ作用下结合于细胞表面的生物素标记怀槐凝集素MALII的平均荧光强度。2.CCK-8法检测高、低表达ST3Gal-Ⅲ卵巢癌细胞株对紫杉醇的化疗敏感性:CCK-8法检测不同剂量梯度范围内紫杉醇持续作用24h,对比HO8910PM、SKOV3的增殖抑制率及半数抑制浓度(IC50),评估ST3Gal-Ⅲ的表达与卵巢癌细胞株对紫杉醇的化疗敏感性的相关性。3.q RT-PCR检测ST3Gal-Ⅲsi RNA对高表达ST3Gal-Ⅲ的HO8910-PM细胞株的下调效率。4.Western Blot检测先后经ST3Gal-Ⅲsi RNA转染、紫杉醇处理后的不同ST3Gal-Ⅲ表达水平的HO8910PM细胞株caspase家族凋亡蛋白的改变,同时联合显色法TUNEL、FACS法检测各组HO8910PM细胞凋亡效应。探讨唾液酸转移酶抑制剂(ST3Gal-Ⅲsi RNA)联合紫杉醇对HO8910PM细胞株的毒性差异。5.q RT-PCR检测紫杉醇对低表达ST3Gal-Ⅲ的SKOV3细胞株的ST3Gal-Ⅲm RNA表达的影响:通过比较不同剂量梯度、作用时间紫杉醇诱导低表达ST3Gal-Ⅲ的SKOV3细胞表面的ST3Gal-Ⅲm RNA表达水平的变化差异,探讨紫杉醇对SKOV3细胞株ST3Gal-Ⅲ表达的影响作用和特征规律。6.q RT-PCR检测先后经紫杉醇、ST3Gal-Ⅲsi RNA处理后的不同处理组的SKOV3细胞ST3Gal-Ⅲ表达。7.Western Blot检测先后经紫杉醇、ST3Gal-Ⅲsi RNA处理后,SKOV3细胞株ST3Gal-Ⅲ表达与caspase家族凋亡蛋白的相关性,进一步应用显色法TUNEL、FACS法检测各组SKOV3细胞凋亡效应。研究不同ST3Gal-Ⅲ表达水平的SKOV3细胞株对紫杉醇化疗药物敏感性的差异,探讨ST3Gal-Ⅲ对SKOV3细胞化疗敏感性的影响。结果1.卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910PM的ST3Gal-Ⅲ基因表达水平及细胞表面ST3Gal-Ⅲ表达水平均存在明显差异:q RT-PCR检测证实ST3Gal-Ⅲm RNA在卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910PM中表达存在差异表达(P0.05);流式检测生物素标记怀槐凝集素MALII结合细胞表面的α2,3-唾液酸的表达水平存在显著差异(P0.05);HO8910PM细胞株ST3Gal-Ⅲ表达水平明显高于SKOV3细胞株。2.高、低表达ST3Gal-Ⅲ卵巢癌细胞株的紫杉醇化疗敏感性不同:通过CCK8法检测不同剂量梯度范围内紫杉醇作用SKOV3、HO8910PM细胞株24h的细胞增殖抑制率,高表达的HO8910PM细胞株的增殖抑制率明显低于低表达的SKOV3细胞株,HO8910PM细胞株(IC50=395.078nmol/L)的紫杉醇半数抑制浓度约为SKOV3细胞株的(IC50=130.645nmol/L)的3倍。3.唾液酸转移酶抑制剂能够有效下调HO8910PM细胞株ST3Gal-Ⅲ表达:q RT-PCR检测si RNA组ST3Gal-Ⅲm RNA的相对表达量为对照组的0.239±0.859倍,两者之间的差异有统计学意义(P=0.000);经紫杉醇处理后的PTX+si RNA组ST3Gal-Ⅲm RNA的相对表达量为PTX+non-si RNA组的0.184±0.037倍,两者之间的差异有统计学意义(P=0.000)。4.HO8910PM细胞株先后经ST3Gal-Ⅲsi RNA转染、紫杉醇联合处理后caspase家族凋亡蛋白表达增强,细胞凋亡增加:Western Blot检测结果显示,PTX+si RNA组、si RNA组ST3Gal-Ⅲ蛋白的表达明显低于对照组、PTX组、PTX-non-si RNA组;PTX+si RNA组caspase凋亡蛋白表达明显高于其他对照组组。FACS法、显色法TUNEL检测各组HO8910PM细胞凋亡情况结果与上相同。5.紫杉醇上调SKOV3细胞株ST3Gal-Ⅲ水平:通过不同浓度紫杉醇(0nmol/L、25nmol/L、50nmol/L、100nmol/L),不同药物处理时间(24h、48h、72h)作用SKOV3细胞株;q RT-PCR检测结果显示紫杉醇作为细胞周期特异性药物,对卵巢癌细胞ST3Gal-Ⅲ诱导表达存在一定的时间-剂量相关性规律;其中50nmol/L浓度的紫杉醇持续作用48h时诱导SKOV3细胞株表达上调效果最为显著,ST3Gal-Ⅲm RNA表达量约为对照组的3倍。6.q RT-PCR检测先后经紫杉醇、ST3Gal-Ⅲsi RNA处理后的不同处理组的SKOV3细胞株ST3Gal-Ⅲ表达水平:结果显示PTX+si RNA组ST3Gal-Ⅲm RNA的相对表达量显著低于其余处理组;PTX96h组、PTX+non-si RNA组、PTX48h组紫杉醇药物处理组ST3Gal-Ⅲm RNA的相对表达量均显著高于对照组的基础表达。7.Western blot检测结果显示各组不同ST3Gal-Ⅲ表达水平SKOV3细胞凋亡蛋白表达情况,PTX+si RNA凋亡蛋白表达明显高于对照组、PTX96h、PTX+non-si RNA组。这与FACS法、显色法TUNEL检测各组SKOV3细胞凋亡结果基本一致。结论1、卵巢癌HO8910PM细胞株表面的ST3Gal-Ⅲ表达水平明显高于SKOV3细胞株。2、低表达ST3Gal-Ⅲ的SKOV3细胞株对紫杉醇更为敏感,而高表达ST3Gal-Ⅲ的HO8910PM细胞株对紫杉醇更为耐受。3、ST3Gal-Ⅲsi RNA联合紫杉醇能够增强HO8910PM细胞株的化疗敏感性。4、低剂量紫杉醇上调卵巢癌SKOV3细胞株ST3Gal-Ⅲ的表达,增强其对紫杉醇的抵抗作用,下调已经增高的ST3Gal-Ⅲ表达可以减弱对紫杉醇的化疗抵抗。5、ST3Gal-Ⅲ降低了卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性,可能通过Caspase途径保护卵巢癌细胞免于药物诱导的细胞凋亡。
【关键词】：卵巢癌 ST3Gal-Ⅲ α2 3-唾液酸 siRNA 紫杉醇 细胞凋亡 化疗敏感性
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要3-6
• Abstract6-10
• 前言10-15
• 第一部分15-24
• 材料和方法15-19
• 结果19-22
• 讨论22-23
• 结论23-24
• 第二部分24-39
• 材料和方法24-31
• 结果31-37
• 讨论37-38
• 结论38-39
• 第三部分39-47
• 材料和方法39-40
• 结果40-45
• 讨论45-46
• 结论46-47
• 全文总结47-48
• 参考文献48-51
• 英文缩略词表51-52
• 硕士研究生期间的科研成果52-53
• 致谢53

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本文编号：834464