艾瑞昔布联合洛铂抑制肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤侵袭和转移及其作用机制的研究

发布时间：2017-09-13 00:51

  本文关键词：艾瑞昔布联合洛铂抑制肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤侵袭和转移及其作用机制的研究

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【摘要】：目的:肺癌的发病率、死亡率均居全球恶性肿瘤首位,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占85%,五年生存率仅10%~15%,严重威胁人类生命健康。肺癌早期症状不典型,确诊时多已发生远处转移,侵袭和转移是影响患者生存率的重要原因。因此,发现新的作用靶点、寻找抑制肺癌侵袭和转移的药物将成为治疗肺癌的突破点。肺癌的侵袭和转移是由多因子、多信号通路参与且互相影响的复杂过程,寻找肺癌侵袭和转移特异性的生物标志物并干预其表达是抑制肺癌侵袭和转移的有效途径之一。上皮钙黏蛋白(E-cadherin)是一类介导同种上皮细胞之间相互黏附的钙依赖性跨膜糖蛋白,调节细胞之间及细胞与基质之间的黏附作用,在非小细胞肺癌增殖、侵袭和转移等多环节中发挥重要作用。埃兹蛋白(Ezrin)是一种膜-细胞骨架连接蛋白,与肺癌组织学类型、细胞分化程度、临床分期无明显相关,与淋巴转移关系较为密切。与张力蛋白同源10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)是第一个具有双特异性磷酸酶活性的新型抑癌基因。研究表明,PTEN蛋白低表达或不表达肺癌患者更易发生淋巴转移,且生存期短于高表达或阳性表达者。皮层肌动蛋白(Cortactin)是一种微丝肌动蛋白结合蛋白,通过影响肿瘤细胞运动、细胞外基质降解、失巢凋亡、细胞黏附等不同作用机制参与肿瘤侵袭和转移。Cortactin蛋白在肺癌组织高表达与淋巴转移、临床分期相关。研究发现环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)在肺癌组织中高表达,与肺癌细胞增殖、凋亡、血管生成、淋巴转移相关。研究表明COX-2抑制剂如塞来昔布、尼美舒利均可抑制肺癌细胞增殖、诱导凋亡、抑制新生血管和淋巴管生成等,从而抑制肺癌侵袭和转移。艾瑞昔布(Imrecoxib)作为新型适度选择性COX-2抑制剂,减少高选择性COX-2抑制剂产生的严重心血管事件。国内外关于艾瑞昔布抑制肿瘤侵袭和转移的报道并不多见。第3代化疗药物洛铂通过形成Pt-GG和Pt-AG链内交叉连接阻碍肿瘤细胞DNA的复制和转录,能明显减轻顺铂的肾毒性,减轻奥沙利铂的神经毒性,具有抗瘤谱广,肿瘤组织中浓度高而血浆中浓度低等优势。目前国内外关于COX-2抑制剂联合化疗药物是否可增强化疗疗效尚不明确,本研究旨在探讨艾瑞昔布单药及其联合洛铂对人肺癌裸鼠移植瘤的生长是否具有抑制作用,通过对E-cadherin、Ezrin、Cortactin及PTEN蛋白及相应m RNA表达的影响,探究艾瑞昔布单药及联合洛铂能否抑制肺癌侵袭和转移及其作用机制。方法:选取30只BALB/c雄性裸小鼠,4~5周龄,体重20~24g,饲养于SPF级环境中。将F12k培养基培养的处于对数期肺腺癌A549细胞制成单细胞悬液,接种于裸鼠右侧腋部皮下,建立人肺癌裸鼠移植瘤模型。当移植瘤平均直径约4mm时造模成功,剔除造模未成功的1只裸鼠,将剩余裸鼠随机分为4组:对照组、艾瑞昔布组、洛铂组、艾瑞昔布联合洛铂组,艾瑞昔布组8只,其余组7只。对照组口服等量灭菌蒸馏水及尾静脉注射等量生理盐水,艾瑞昔布组经口灌胃艾瑞昔布片40mg.kg-1.d-1同时尾静脉注射等量生理盐水,洛铂组经尾静脉注射洛铂7.5mg.kg-1.w-1同时口服等量灭菌蒸馏水,艾瑞昔布联合洛铂组给药方法和剂量与单一用药组相同。给药6周后,采用颈椎脱臼法处死裸鼠并完整剥取肿瘤组织。使用游标卡尺测量移植瘤的长径(a)、短径(b),按公式V=ab2/2,估算移植瘤近似体积并称重量。用4%多聚甲醛固定肿瘤组织,免疫组织化学和流式细胞术分别检测各组移植瘤组织E-cadherin、Ezrin、PTEN及Cortactin蛋白表达,Real-Time PCR检测各组移植瘤组织E-cadherin、Ezrin、PTEN及Cortactin m RNA含量。结果:1接种30只裸鼠,29只成瘤,成瘤时间集中在7~12天。艾瑞昔布组1只裸鼠死于灌胃。与对照组相比,艾瑞昔布组、洛铂组及艾瑞昔布联合洛铂组肿瘤体积减小(P?0.05),重量减轻(P?0.05),坏死区域增多;与单药组相比,艾瑞昔布联合洛铂组肿瘤体积减小(P?0.05),重量减轻(P?0.05),坏死区域增多。2免疫组织化学及流式细胞术检测移植瘤组织E-cadherin、Ezrin、PTEN及Cortactin蛋白表达结果表明,艾瑞昔布组及艾瑞昔布联合洛铂组E-cadherin、PTEN蛋白表达较对照组升高(P?0.05),Ezrin、Cortactin蛋白表达较对照组降低(P?0.05);艾瑞昔布联合洛铂组E-cadherin、PTEN蛋白表达较单药组升高(P?0.05),Ezrin、Cortactin蛋白表达较单药组降低(P?0.05);艾瑞昔布组与洛铂组E-cadherin、Ezrin、PTEN及Cortactin蛋白表达无明显差别(P?0.05)。3 Real-Time PCR检测移植瘤组织E-cadherin、Ezrin、PTEN及Cortactin m RNA含量结果表明,艾瑞昔布组及艾瑞昔布联合洛铂组E-cadherin、PTEN m RNA含量较对照组升高(P?0.05),Ezrin、Cortactin m RNA含量较对照组降低(P?0.05);艾瑞昔布联合洛铂组E-cadherin、PTEN m RNA含量较单药组升高(P?0.05),Ezrin、Cortactin m RNA含量较单药组降低(P?0.05);艾瑞昔布组与洛铂组E-cadherin、Ezrin、PTEN及Cortactin m RNA含量无明显差别(P?0.05)。结论:1艾瑞昔布单药及联合洛铂均能抑制非小细胞肺癌的生长。2艾瑞昔布单药及联合洛铂可上调E-cadherin蛋白及E-cadherin m RNA、PTEN蛋白及PTEN m RNA的表达,下调Ezrin蛋白及Ezrin m RNA、Cortactin蛋白及Cortactin m RNA的表达,抑制非小细胞肺癌侵袭和转移;艾瑞昔布联合洛铂可提高艾瑞昔布或洛铂单药抑制非小细胞肺癌侵袭和转移的疗效,艾瑞昔布对洛铂化疗可能具有协同作用。3艾瑞昔布可能成为抑制肺癌侵袭和转移新的作用靶点,成为肺癌治疗的突破点。
【关键词】：肺癌 侵袭转移 艾瑞昔布 洛铂 上皮钙黏蛋白 埃兹蛋白 磷酸酶抑制基因 皮层肌动蛋白
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 英文缩写12-13
• 前言13-14
• 材料与方法14-22
• 结果22-26
• 附图26-32
• 附表32-34
• 讨论34-39
• 结论39
• 参考文献39-44
• 综述 Cortactin与非小细胞肺癌侵袭和转移研究进展44-51
• 参考文献47-51
• 致谢51-52
• 个人简历52

【参考文献】

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1 李俊伟;杨红;张尚福;余南彬;周清华;;ezrin和E-cadherin在非小细胞肺癌中的表达及意义[J];中国肺癌杂志;2007年03期

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本文编号：840535