miR-34a对胃癌细胞迁移侵袭的调控机制及胃癌临床预后相关因素的研究

发布时间：2017-09-14 07:06

  本文关键词：miR-34a对胃癌细胞迁移侵袭的调控机制及胃癌临床预后相关因素的研究

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【摘要】：目的:侵袭和转移是恶性肿瘤的重要特征之一,直接影响晚期肿瘤患者的临床治疗效果及患者预后生存情况。越来越多的证据表明micro RNA(mi RNA)与胃癌的迁移侵袭密切相关。Fra-1是转录因子AP-1(Activator Protein 1)的一个调节亚基。AP-1通过与靶基因启动子上的TPA反应元件结合,调控靶基因的转录,从而参与肿瘤的发生、发展过程。Fra-1是ras激活的AP-1复合物中的主要成分。多种恶性肿瘤如、结肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌等中高表达,并且与这些肿瘤的侵袭、转移等一系列病理过程有关。在本实验室中我们检测迁移侵袭性不同的胃癌细胞株SGC-7901、BCG-823中mi R-34a的表达情况,研究mi R-34a对胃癌细胞迁移、侵袭及增殖方面的影响,并初步探讨其分子调控机制。方法:运用实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaetion,RT-PCR)法分析mi R-34a在迁移侵袭性不同的胃癌细胞株SGC-7901,BCG-823中的表达情况。划痕迁移实验、Transwell侵袭实验和CCK8实验分别检测mi R-34a对SGC-7901,BCG-823细胞的迁移、侵袭和增殖能力的影响。采用生物信息学预测及荧光素酶报告基因实验验证mi R-34a对靶基因Fos蛋白相关抗原-1(Fos Related Atigen-1,Fra-1)的靶向调控作用。Western blotting检测Fra-1,金属基质蛋白酶-9(matrix metalloproteinases 9,MMP9),Cyclin D1蛋白的水平。结果:mi R-34a在迁移侵袭性强的胃癌细胞株SGC-7901中的表达水平明显低于迁移侵袭能力较弱的BCG-823。转染mi R-34a后,两种胃癌细胞SGC-7901,BCG-823穿过Trasnwell小室的细胞数及细胞迁移力明显小于转染阴性对照组,说明mi R-34a可抑制胃癌细胞迁移及侵袭能力。CCK8实验结果显示转染mi R-34a后两种胃癌细胞株的吸光值都明显低于转染阴性对照组,提示其增殖能力受到抑制。荧光素酶报告基因及Western blotting实验结果表明,mi R-34a能够直接靶向调节Fra-1,降低胃癌中Fra-1的表达。转染的mi R-34a还可使胃癌细胞株SGC-7901、BCG-823中迁移侵袭及周期相关蛋白MMP9,Cyclin D1表达量下降。结论:高表达的mi R-34a可通过靶向调控Fra-l的表达,并影响下游侵袭转移相关蛋白分子MMP9、Cyclin D1的表达从而抑制胃癌细胞迁移、侵袭及增殖能力。目的:随着全球生活方式的改变和经济的发展,胃癌的发病率逐年增高,而生存率没有较大变化,胃癌患者预后仍然较差。近来,淋巴细胞和单核细胞比(lymphocyte to monocyte ratio,LMR)已被报道与某些癌症的临床预后相关,但在胃癌中缺少相关的研究。本文探讨II/III期胃癌患者术前外周血LMR对患者术后预后的评估意义。方法:选取2008年2月至2008年12月在南京医科大学第一附属医院行根治性切除术的胃癌患者426例,检测外周血淋巴细胞计数、单核细胞计数,通过淋巴细胞计数与单细胞计数的比值获得LMR。根据受试者工作特征(ROC)曲线,获得LMR最佳截断值。采用卡方检验评估LMR与各临床特征之间的关系。采用Kaplan-Meier法计算生存率并用log-rank法进行单因素分析。采用COX比例风险模型进行多因素分析。结果:肿瘤负荷较小者LMR较高(P0.001)。预后相关临床病例因素的单因素分析结果提示:在总生存期(overall survival,OS)方面,较低的LMR,升高的单核细胞(P=0.01),较大的肿瘤负荷(P0.001),血管/神经浸润(P0.001),切缘阳性(P=0.042),TNM分期为III期(P0.001)及未进行辅助化疗(P=0.045)是影响患者总生存期的不良预后因素。同样在无复发生存期(recurrence-free survival,RFS)中,低LMR(P=0.001),高单核细胞数(P=0.016),较大肿瘤负荷(P=0.007),血管神经/浸润(P0.001),切缘阳性(P=0.002),TNM分期为III期(P0.001)患者,是影响预后的高风险因素。多因素COX风险比例函数模型分析结果显示高LMR与无病生存期存在临界相关(HR=0.775;95%CI:0.592-1.01;P=0.06)。而在总生存期(OS)方面,LMR(HR=0.688;95%CI:0.521-0.908;P=0.008)可作为影响预后的独立性因素。亚组分析显示,升高的LMR除在III期患者RFS中产生临界意义(P=0.052),在TNM分期为II期或III期以及无论是否进行辅助化疗的患者中均为指示良好预后的指标。
【关键词】：胃癌 miR-34a 迁移 侵袭 Fra-1 淋巴细胞单核细胞比 胃癌 预后
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 第一部分 miR-34a对胃癌细胞迁移侵袭能力的调控及机制研究5-50
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-8
• 前言8-13
• 参考文献10-13
• 第一节 miR-34a在胃癌细胞株SGC-7901和BCG-823中的表达材料与方法的表达13-23
• 材料与方法13-19
• 结果19-20
• 讨论20-22
• 结论22-23
• 第二节 miR-34a对胃癌细胞迁移侵袭及增殖能力的调控23-31
• 材料与方法23-26
• 结果26-28
• 讨论28-30
• 结论30-31
• 第三节 miR-34a对胃癌细胞迁移侵袭调控的分子机制31-41
• 材料与方法31-36
• 结果36-39
• 讨论39-41
• 结论41
• 参考文献41-49
• 全文总结49-50
• 第二部分II / III期胃癌患者术前淋巴细胞单核细胞比（LMR）与预后的关系50-69
• 中文摘要50-51
• 英文摘要51-52
• 前言52
• 材料与方法52-53
• 结果53-60
• 讨论60-62
• 结论62
• 参考文献62-69
• 文献综述69-81
• 参考文献76-81
• 英文缩略词表81-82
• 攻读学位期间发表文章情况82-83
• 致谢83

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本文编号：848572