miR-4449在多发性骨髓瘤中的表达及生物学功能的研究

发布时间：2017-09-14 10:10

  本文关键词：miR-4449在多发性骨髓瘤中的表达及生物学功能的研究

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【摘要】：目的通过检测骨髓和血清标本mi R-4449表达水平,探讨mi R-4449作为多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)血清辅助诊断标志物的临床价值及与其它临床指标的相关性,并进一步通过细胞水平实验验证mi R-4449的肿瘤细胞生物学行为,证实其在MM中的癌基因作用及相关临床应用价值。方法用基因芯片法检测4例MM病人和3例健康对照者的骨髓样本中不同mi RNA的表达水平,将数据进行标准化后,对差异mi RNA进行聚类分析。用TRIzol Reagent法提取骨髓总RNA,用AMBION mir Vana PARIS Kit法提取血清总RNA,随后采用特异茎环引物将内参基因U6与目的基因mi R-4449分别逆转录,采用SYBR Green I q RT-PCR法检测16例MM病人和5例健康对照者骨髓mi R-4449的表达量,同法检测71例MM病人以及46例健康对照者血清mi R-4449的表达量,分析它们与其他临床指标的相关性以及MM病人骨髓及血清标本mi R-4449相对表达量的相关性。将mi R-4449模拟物、抑制物以及各自阴性对照分别转染入U266细胞,使用q RT-PCR检测各组mi R-4449的表达水平,通过Transwell小室检测各组细胞的迁移能力,WST-1法检测各组细胞的增殖能力,FCM法检测各组细胞的凋亡情况。结果芯片结果显示,MM病人骨髓mi R-4449的相对表达量5.28±0.763显著高于健康对照者2.47±1.27(P0.05)。用q RT-PCR法验证发现,MM病人骨髓mi R-4449的相对表达量2.140±1.423显著高于健康对照者0.815±0.165(P0.05);其血清mi R-4449的相对表达量2.112±2.101也显著高于健康对照者0.357±0.235(P0.05)。MM病人骨髓mi R-4449相对表达量与对应血清mi R-4449相对表达量呈正相关(r=0.833,P0.05)。将血清mi R-4449相对表达量与临床相关指标进行相关性分析后发现,MM病人血清mi R-4449相对表达量与血清β2-M、轻链λ和轻链κ浓度呈正相关(r=0.48,P0.05;r=0.56,P0.05;r=0.56,P0.05)。血清mi R-4449相对表达量与轻链λ、轻链κ和β2-M联合检测能有效提高MM的诊断灵敏度。U266细胞转染mi R-4449模拟物和抑制物后,模拟物组细胞增殖能力显著高于抑制物组,细胞迁移数也显著高于抑制物组(P0.05),细胞凋亡数则显著低于抑制物组(P0.05)。结论Mi R-4449在MM病人骨髓和血清中均异常高表达,且两者表达水平呈正相关,其在MM中可能起着癌基因的作用,血清mi R-4449可成为MM辅助诊断的一个标志物。血清mi R-4449相对表达量与血清轻链λ、轻链κ和β2-M浓度呈正相关,将四个指标联合检测能有效提高MM的诊断灵敏度。在体外抑制MM细胞内mi R-4449的表达,可抑制MM细胞的增殖和迁移,并促进其凋亡,mi R-4449有机会成为MM靶向治疗新靶点。
【关键词】：mi R-4449 多发性骨髓瘤 血清
【学位授予单位】：南通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.3
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一章 绪论11-14
• 1.1 课题来源、研究目的和意义11-12
• 1.2 国内外研究概况12-13
• 1.3 论文的主要研究内容13-14
• 第二章 材料与方法14-24
• 2.1 研究资料及仪器设备14-15
• 2.1.1 研究对象14
• 2.1.2 主要设备与仪器14-15
• 2.1.3 实验试剂15
• 2.2 实验流程与方法15-24
• 2.2.1 血清标本采集及处理15
• 2.2.2 骨髓、细胞标本采集及处理15-16
• 2.2.3 血清总RNA提取16-17
• 2.2.4 骨髓、细胞总RNA提取17-18
• 2.2.5 基因芯片技术18
• 2.2.6 逆转录反应18-19
• 2.2.7 实时荧光定量PCR（q RT-PCR）19-20
• 2.2.8 临床标本miR-4449 表达水平的检测20
• 2.2.9 细胞培养技术20-21
• 2.2.9.1 细胞复苏20-21
• 2.2.9.2 细胞培养21
• 2.2.9.3 细胞冻存21
• 2.2.10 细胞转染技术21-22
• 2.2.11 细胞增殖实验（WST-1）22
• 2.2.12 细胞迁移实验22-23
• 2.2.13 细胞凋亡检测实验23
• 2.2.14 统计学分析23-24
• 第三章 结果24-35
• 3.1 基因芯片筛查异常表达的miRNA24-25
• 3.2 实时荧光定量PCR检测miR-4449 表达水平方法的建立25-26
• 3.3 miR-4449 的骨髓相对表达量检测及检测诊断价值26-27
• 3.3.1 MM病人血骨髓清miR-4449 相对表达量26-27
• 3.3.2 miR-4449 骨髓检测诊断价值27
• 3.4 miR-4449 的血清相对表达量检测及意义27-31
• 3.4.1 MM病人血清miR-4449 相对表达量27-28
• 3.4.2 miR-4449 血清检测诊断价值28
• 3.4.3 MM病人的骨髓及血清标本miR-4449 相对表达量的相关性28
• 3.4.4 MM病人血清miR-4449 相对表达量与性别及临床分型的关系28-29
• 3.4.5 MM病人血清miR-4449 相对表达量与临床生化指标的相关性29-30
• 3.4.6 血清miR-4449 与轻链λ、轻链κ、β2-M的联合检测30-31
• 3.5 转染效率直观图31-32
• 3.6 miR-4449 促进U266细胞增殖32-33
• 3.7 miR-4449 促进U266细胞迁移33-34
• 3.8 miR-4449 抑制U266细胞凋亡34-35
• 第四章 讨论35-40
• 第五章 结论40-41
• 参考文献41-45
• 英文缩写词表45-46
• 综述46-62
• 综述参考文献56-62
• 在攻读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目62-63
• 致谢63

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本文编号：849397