GC-MSC诱导Treg、Th17细胞的作用及机制

发布时间：2017-09-14 10:24

  本文关键词：GC-MSC诱导Treg、Th17细胞的作用及机制

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【摘要】：目的:通过研究GC-MSC对健康人PBMC中Treg、Th17细胞平衡的影响探讨GC-MSC对胃癌微环境的免疫调节功能,从而为后续实验研究GC-MSC促进胃癌的发生发展的作用机制提供重要依据。方法:通过组织贴壁法分离培养临床病人胃癌及癌旁组织中的GCMSC及GCN-MSC,并通过成脂诱导实验、成骨诱导实验及表面标记的检测鉴定GC-MSC。使用GC-MSC-CM及直接共培养的方式作用于健康人PBMC,在作用后的第3天、第6天流式检测PBMC中Th17、Treg细胞比例,探究GC-MSC对健康人PBMC中Treg、Th17细胞比例的影响。使用GC-MSC-CM作用于健康人CD4~+Na?ve T细胞,在第6天流式检测Treg、Th17细胞比例,探究GC-MSC对Treg、Th17细胞分化的影响。使用CFSE标记健康人PBMC然后使用GCMSC-CM连续处理6天,在第3天、第6天检测PBMC中Treg、Th17细胞CFSE表达情况,研究GC-MSC对Treg、Th17细胞增殖的影响。结果:从临床胃癌组织中成功分离培养了高纯度的GC-MSC。GCMSC-CM可以使健康人PBMC中Treg细胞比例升高,Th17细胞比例降低,与GC-MSC直接共培养后PBMC中Th17细胞比例也出现明显减少,但是Treg细胞比例没有明显改变。GC-MSC-CM可以诱导健康人CD4~+Na?ve T细胞向Treg细胞分化,但不能诱导CD4~+Na?ve T细胞向Th17细胞分化。GC-MSC-CM对健康人PBMC中Th17细胞的增殖具有明显抑制作用,但对Treg细胞无明显影响。结论:研究发现,GC-MSC可以通过促进健康人PBMC中Treg细胞的分化及抑制Th17细胞的增殖使Treg/Th17细胞的平衡向Treg细胞极化。为后续实验筛选GC-MSC诱导Treg、Th17细胞的关键因子,探讨GC-MSC调节Treg、Th17细胞的分子机制及评价关键因子在临床胃癌患者诊断,预后判断的临床意义等提供重要实验依据。
【关键词】：胃癌间质干细胞 Treg细胞 Th17细胞
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2;R730.43
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 第一章 绪论13-21
• 1.1 胃癌13
• 1.2 肿瘤微环境13
• 1.3 MSC与肿瘤13-15
• 1.3.1 MSC的生物学特性14
• 1.3.2 MSC与炎症或肿瘤微环境14-15
• 1.4 Th17/Treg细胞的平衡与肿瘤15-17
• 1.4.1 Th17/Treg细胞与肿瘤15-16
• 1.4.2 Th17/Treg细胞的平衡16
• 1.4.3 Th17/Treg细胞的平衡与炎症或肿瘤微环境16-17
• 1.5 MSC与Treg/Th17细胞17-21
• 1.5.1 MSC对Treg细胞的调节作用18-19
• 1.5.2 MSC对Th17细胞的调节作用19
• 1.5.3 影响MSC调节Th17/Treg细胞的环境因素19-21
• 第二章 研究目的、方法、实验设计方案和意义21-24
• 2.1 研究目的21
• 2.2 研究方法21
• 2.3 实验设计方案21-23
• 2.4 研究意义23-24
• 第三章 GC-MSC对健康人PBMC中Th17、Treg细胞比例的影响24-40
• 3.1 材料和试剂24-27
• 3.1.1 标本采集24
• 3.1.2 主要试剂24-26
• 3.1.3 主要器材26-27
• 3.1.4 溶液的配置27
• 3.2 方法27-31
• 3.2.1 健康人PBMC的分离27
• 3.2.2 GC-MSC的分离培养27-28
• 3.2.3 GC-MSC的鉴定28-29
• 3.2.4 MSC上清的制备29
• 3.2.5 Treg、Th17细胞流式检测29-30
• 3.2.6 GC-MSC、GCN-MSC上清对健康人PBMC中Treg、Th17细胞比例的影响30
• 3.2.7 GC-MSC、GCN-MSC与健康人PBMC直接共培养后对Treg、Th17细胞比例的影响30-31
• 3.2.8 统计分析31
• 3.3 结果31-38
• 3.3.1 GC-MSC的分离培养及鉴定31-33
• 3.3.2 GC-MSC-CM及GCN-MSC-CM对健康人PBMC中Treg、Th17细胞比例的影响33-36
• 3.3.3 GC-MSC及GCN-MSC与健康人PBMC直接共培养后对Treg、Th17细胞比例的影响36-38
• 3.4 讨论38-40
• 第四章 GC-MSC-CM对健康人PBMC中Treg、Th17细胞分化和增殖的影响40-51
• 4.1 材料与试剂40-41
• 4.1.1 标本采集40
• 4.1.2 主要试剂40
• 4.1.3 主要器材40-41
• 4.1.4 CFSE溶液的配置41
• 4.2 方法41-42
• 4.2.1 健康人初始CD4~+T细胞（CD4~+Na?ve T细胞）的分离41
• 4.2.2 CD4~+ Na?ve T细胞鉴定41
• 4.2.3 CFSE对健康人PBMC的标记41-42
• 4.2.4 GC-MSC-CM诱导健康人CD4~+Na?ve T细胞分化为Treg、Th17细胞的研究42
• 4.2.5 GC-MSC-CM对健康人PBMC中Treg、Th17细胞增殖的影响42
• 4.2.6 统计分析42
• 4.3 结果42-49
• 4.3.1 健康人CD4~+ Na?ve T细胞鉴定42-43
• 4.3.2 GC-MSC-CM诱导健康人CD4~+Na?ve T细胞分化为Treg、Th17细胞的研究43-45
• 4.3.3 GC-MSC-CM对健康人PBMC中Treg、Th17细胞增殖的影响45-49
• 4.4 讨论49-51
• 第五章 结论与展望51-52
• 一、结论51
• 二、展望51-52
• 致谢52-53
• 攻读硕士学位期间发表的的学术论文及参加的会议53-54
• 一．发表的论文53
• 二．参加会议53-54
• 参考文献54-60

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本文编号：849470