胃癌干细胞标记物的探索及三氧化二砷对胃癌细胞生长抑制的研究

发布时间：2017-09-18 12:09

  本文关键词：胃癌干细胞标记物的探索及三氧化二砷对胃癌细胞生长抑制的研究

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【摘要】：胃癌是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一,目前手术治疗是胃癌的主要治疗方式,但是切除后,仍有部分病人的肿瘤会发生复发和转移。研究认为导致肿瘤再次发生的是肿瘤干细胞。而表面特异性标记物可以鉴定肿瘤干细胞,并通过研究其生物学和病理学特性确定它们在肿瘤发生发展和预后中的作用。本实验首先通过干细胞标记物在胃癌细胞中表达的筛查,然后采用间接荧光抗体双重染色法检测胃癌组织中CD133和CD14的蛋白表达,鉴定胃癌干细胞并分析其与胃癌患者临床病理参数之间的关系。从人胃癌新鲜组织块内,获得稳定生长的胃癌原代细胞后,通过Q-PCR方法,检测CD133和CD14基因的表达情况。同时将三氧化二砷作用于胃癌细胞系NCI-N87,对细胞进行观察,并通过MTT法和TUNEL法检测其对细胞增殖和凋亡的影响。实验证明,CD14在胃癌细胞中呈阳性反应。CD133+/CD14+可做为胃癌鉴定的标记物,也可作为早期诊断和预后判断的重要参考指标,实验也揭示,CD133和CD14的基因在胃癌组织内的表达量均高于癌旁组织。通过三氧化二砷诱导其细胞凋亡,对胃癌细胞系NCI-N87的细胞增殖产生明显的抑制作用。本实验的结果为胃癌干细胞增加了新的标记物,为胃癌的治疗和预后提供重要的实验依据,也对胃癌细胞的增殖抑制作用提供了新的思路。
【关键词】：胃癌干细胞 CD14 免疫荧光 三氧化二砷
【学位授予单位】：牡丹江师范学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-9
• 符号说明9-10
• 前言10-12
• 第1章 绪论12-22
• 1.1 干细胞概念及分类12
• 1.1.1 概念12
• 1.1.2 干细胞的分类12
• 1.2 肿瘤干细胞理论的提出以及来源假说12-13
• 1.3 干细胞与肿瘤干细胞的关系与区别13-14
• 1.3.1 干细胞与肿瘤干细胞的关系13
• 1.3.2 肿瘤干细胞与干细胞的区别13-14
• 1.4 肿瘤干细胞的主要调控通路14-15
• 1.4.1 Wnt通路14
• 1.4.2 Notch通路14
• 1.4.3 Shh通路14-15
• 1.5 胃癌干细胞15-17
• 1.5.1 胃癌干细胞的生物学特性15
• 1.5.2 胃癌干细胞的来源15-16
• 1.5.3 胃癌干细胞的微环境16
• 1.5.4 胃癌干细胞的分离和鉴定16-17
• 1.5.5 胃癌干细胞的表面标记物17
• 1.6 干细胞与肿瘤干细胞的相关标记物17-19
• 1.6.1 ALDH117
• 1.6.2 CD3417-18
• 1.6.3 CD10518
• 1.6.4 Oct418
• 1.6.5 CD1418-19
• 1.7 消化道肿瘤的特异性标记物CD13319-20
• 1.8 三氧化二砷的特点以及它对恶性肿瘤的作用20-21
• 1.8.1 三氧化二砷的特点20
• 1.8.2 三氧化二砷的抗肿瘤机制20-21
• 1.9 结语21-22
• 第2章 胃癌标记物的实验研究22-26
• 2.1 材料、仪器和试剂22-24
• 2.1.1 标本来源22
• 2.1.2 主要仪器22-23
• 2.1.3 主要试剂23
• 2.1.4 主要溶液配制方法23-24
• 2.2 方法24-25
• 2.2.1 免疫荧光鉴定24
• 2.2.2 实验结果判定24-25
• 2.3 结果25
• 2.4 小结25-26
• 第3章 胃癌组织中CD133~+/CD14~+的表达及其临床意义26-37
• 3.1 材料、仪器和试剂26-28
• 3.1.1 标本来源26
• 3.1.2 主要仪器26-27
• 3.1.3 主要试剂27
• 3.1.4 主要溶液配制方法27-28
• 3.2 方法28-29
• 3.2.1 间接荧光抗体技术28-29
• 3.2.2 实验结果判定29
• 3.2.3 统计学方法29
• 3.3 结果29-36
• 3.3.1 病例特点29-30
• 3.3.2 CD133和CD14蛋白的表达与临床病理特征之间的关系30-33
• 3.3.3 CD133~+/CD14~+蛋白的表达与临床病理特征之间的关系33-35
• 3.3.4 人胃癌中CD14和CD133表达的相互关系35-36
• 3.4 小结36-37
• 第4章 原代胃癌细胞内CD14与CD133基因的表达情况37-46
• 4.1 材料、仪器和试剂37-39
• 4.1.1 标本来源37
• 4.1.2 主要仪器37-38
• 4.1.3 主要试剂与耗材38
• 4.1.4 主要溶液配制方法38-39
• 4.2 方法39-42
• 4.2.1 胃癌细胞的分离和培养39
• 4.2.2 细胞的形态学观察39-40
• 4.2.3 RNA的提取40
• 4.2.4 逆转录cDNA40-41
• 4.2.5 引物设计41
• 4.2.6 实时荧光定量核酸扩增检测41-42
• 4.2.7 统计学方法42
• 4.3 结果42-45
• 4.3.1 原代细胞培养观察42-43
• 4.3.2 RNA浓度检测结果43-44
• 4.3.3 实时荧光定量核酸扩增检测结果44-45
• 4.4 小结45-46
• 第5章 三氧化二砷对胃癌细胞增殖影响的检测46-53
• 5.1 材料、仪器和试剂46-47
• 5.1.1 实验材料46
• 5.1.2 主要仪器46
• 5.1.3 主要试剂与耗材46-47
• 5.1.4 主要溶液配制方法47
• 5.2 方法47-49
• 5.2.1 不同浓度的As_2O_3抑制细胞生长的观察47-48
• 5.2.2 MTT法进行细胞增殖检测48
• 5.2.3 TUNEL法进行细胞凋亡检测48-49
• 5.2.4 统计学方法49
• 5.3 结果49-52
• 5.3.1 As_2O_3对NCI-N87细胞生长的影响49-51
• 5.3.2 As_2O_3对NCI-N87细胞增殖的影响51
• 5.3.3 As_2O_3对NCI-N87细胞凋亡的影响51-52
• 5.4 小结52-53
• 第6章 讨论53-57
• 6.1 关于胃癌细胞与干细胞标记物的关系53
• 6.2 关于联合检测CD14和CD133在人胃癌干细胞中的表达53-55
• 6.3 关于CD14和CD133的阳性表达与临床病理参数之间的关系55-56
• 6.4 关于三氧化二砷对胃癌细胞系NCI-N87生长抑制的作用56-57
• 结论57-58
• 参考文献58-67
• 致谢67-68
• 攻读学位期间发表的学术论文68

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