观察LETM1蛋白在结肠癌细胞对化疗药物敏感性的影响机制及相关研究

发布时间：2017-09-19 19:11

  本文关键词：观察LETM1蛋白在结肠癌细胞对化疗药物敏感性的影响机制及相关研究

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【摘要】：目的：探讨奥沙利铂耐药细胞株-HCT116产生的耐药机制,观察LETM1蛋白水平变化对其影响。方法：结肠癌细胞株HCT116和奥沙利铂耐药细胞株HCT116-OxR的传代培养；噻唑蓝(MTT)实验检测奥沙利铂对细胞存活和死亡情况,并绘制生长曲线,筛选药物浓度；利用荧光素酶检测试剂盒检测细胞和线粒体内ATP的含量；Western-blot法检测HCT116和HCT116-OxR细胞中LETM1蛋白和糖酵解相关蛋白的表达变化；葡萄糖和乳酸检测试剂盒检测两种细胞内的葡萄糖和乳酸含量；通过线粒体膜电位检测试剂盒测定线粒体耗氧量两种细胞的耗氧量的相对值。结果：比较HCT116-OxR和HCT116细胞株,发现HCT116-OxR细胞线粒体耗氧量降低、线粒体ATP含量减少,而胞浆内ATP含量相对增加；(2)比较HCT116-OxR和HCT116细胞株,发现培养液葡头糖含量减少,相反乳酸含量增加；(3)在HCT116-OxR细胞株内HIF-1α、Glu-1、HK-2及LETMl蛋白表达水平升高,利用3-BrPA抑制糖酵解,则逆转HCT116-OxR细胞株内HIF-1α、Glu-1、HK-2及LETM1蛋白的表；(4)利用3-BrPA抑制糖酵解,增加了HCT116-OxR对奥沙利铂的敏感性。结论：1.HCT116-OxR细胞株通过抑制线粒体功能、增加糖酵解途径产生ATP,导致对奥沙利铂的耐药；2.细胞浆内ATP含量是结肠癌细胞引起奥沙利铂耐药的关键原因；3.结肠癌细胞对化疗药物耐药机制,可能是通过增加LETM1蛋白表达的水平,从而抑制线粒体功能,增加胞浆内ATP含量而引起。
【关键词】：LETM1蛋白 结肠癌 化疗敏感
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-8
• 缩略词8-10
• 第一章 前言10-12
• 第二章 材料与方法12-16
• 2.1 材料12
• 2.1.1 研究对象12
• 2.1.2 主要试剂12
• 2.2 实验方法12-15
• 2.3 统计学处理15-16
• 第三章 结果16-21
• 3.1 HCT116和HCT116-OXR细胞的耐药性16-17
• 3.2 线粒体的代谢变化17-18
• 3.3 糖酵解过程的变化18-19
• 3.4 LETM1增强了耐受细胞的化疗敏感性19-20
• 3.5 3-BRPA增强了耐受细胞的化疗敏感性20-21
• 第四章 讨论21-23
• 第五章 结论23-24
• 参考文献24-28
• 综述28-43
• 参考文献39-43
• 致谢43

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本文编号：883400