2,3-吲哚醌抗人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞侵袭及迁移机制研究

发布时间：2017-09-20 11:24

  本文关键词：2,3-吲哚醌抗人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞侵袭及迁移机制研究

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【摘要】：背景:2,3-吲哚醌(Isatin)是色氨酸代谢途径的产物,广泛存在于人和哺乳动物的组织和体液中。已经发现Isatin对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长有显著的抑制作用,本研究旨在研究Isatin对SH-SY5Y细胞侵袭和迁移的抑制作用及其机制。方法:不同浓度Isatin(100,200,400μmol/L)处理细胞,transwell小室测定SH-SY5Y细胞侵袭能力,划痕法测定SH-SY5Y细胞迁移能力,Real-time PCR检测SH-SY5Y细胞MMP2和MMP9的表达水平;Western blot检测SH-SY5Y细胞MMP2和MMP9的表达和STAT3的磷酸化水平。结果:Isatin能显著抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞侵袭和迁移能力。Isatin处理细胞后,SH-SY5Y细胞穿过Transwell小室的数量明显减少,侵袭抑制率分别为42.14%和87.42%(P0.01),200μmol/L Isatin在36 h和48 h对SH-SY5Y细胞迁移抑制率为42.78%和45.03%(P0.05)。Real-time PCR显示,随着Isatin浓度增加,MMP2和MMP9 m RNA表达显著下降(P0.05)。Western blot结果显示,随着Isatin浓度增加,MMP2和MMP9 m RNA和蛋白表达显著下降(P0.05);Western blot结果表明,随着Isatin浓度增加,STAT3磷酸化水平显著下降(P0.01),且呈浓度依赖关系。结论:Isatin明显抑制SH-SY5Y细胞侵袭和迁移,该作用可能和MMP2,MMP9表达量降低以及下调磷酸化STAT3有关。
【关键词】：2 3-吲哚醌 人神经母细胞瘤 侵袭 MMPs STAT3
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.4
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 第1章 实验材料8-10
• 1.1 细胞株8
• 1.2 主要试剂耗材8-9
• 1.3 主要仪器9-10
• 第2章 实验方法10-17
• 2.1 人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系的体外培养10
• 2.2 Transwell测定细胞侵袭能力10-11
• 2.2.1 包被基底膜10
• 2.2.2 水化基底膜10
• 2.2.3 接种细胞10
• 2.2.4 细胞培养10-11
• 2.2.5 细胞固定、计数11
• 2.3 划痕实验测定测定细胞迁移能力11
• 2.3.1 细胞培养11
• 2.3.2 划痕11
• 2.3.3 细胞培养11
• 2.3.4 计算细胞距离11
• 2.4 实时定量(Real-time)PCR检测MMP2、MMP9 mRNA相对表达量11-13
• 2.4.1 总RNA的提取11-12
• 2.4.2 RNA琼脂糖电泳检测RNA纯度和完整性12
• 2.4.3 cDNA的合成12-13
• 2.4.4 Real-time PCR检测mRNA相对表达13
• 2.5 Western Blotting检测MMP2，MMP9，pSTAT3的相对表达量13-16
• 2.5.1 试剂配制13-14
• 2.5.2 总蛋白质的提取14
• 2.5.3 BCA法测定总蛋白浓度14
• 2.5.4 制备聚丙烯酰胺凝胶14-15
• 2.5.5 SDS-PAGE电泳15
• 2.5.6 半干法转膜15
• 2.5.7 封闭15
• 2.5.8 孵育抗体15-16
• 2.5.9 显色16
• 2.6 统计学方法16-17
• 第3章 实验结果17-22
• 3.1 Isatin对SH-SY5Y细胞侵袭的影响17
• 3.2 Isatin对SH-SY5Y细胞迁移的影响17-18
• 3.3 Isatin对MMP2、MMP9 mRNA相对表达量的影响18-19
• 3.4 Isatin对MMP2、MMP9蛋白相对表达量的影响19-20
• 3.5 Isatin对STAT3 Tyr705位点磷酸化的影响20-22
• 第4章 讨论22-25
• 结论25-26
• 参考文献26-32
• 综述 神经母细胞瘤转移分子机制的研究进展32-53
• 综述参考文献44-53
• 攻读学位期间的研究成果53-54
• 致谢54-55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 曾明;崔永华;吴翠环;;生长抑素受体与P-STAT3在人嗅神经母细胞瘤中的表达及意义[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2010年15期

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本文编号：887764