双色荧光示踪肝癌模型的特性分析及miR-146b-5p影响肝癌细胞增殖、迁移能力的实验研究

发布时间：2017-09-26 17:19

  本文关键词：双色荧光示踪肝癌模型的特性分析及miR-146b-5p影响肝癌细胞增殖、迁移能力的实验研究

  更多相关文章： 肝癌 动物模型 荧光示踪 活体成像 肿瘤转移 肝癌 miR-146b-5p 细胞增殖 迁移 靶基因

【摘要】：第一部分双色荧光示踪肝癌模型的特性分析目的:建立红、绿双色荧光示踪肝癌动物模型并对其肿瘤生物学特性进行分析。方法:采用直接注射法将带有红色荧光的肝癌细胞接种于绿色荧光裸鼠肝叶内,建立红、绿双色荧光示踪肝癌动物模型。小动物活体荧光成像仪实时观察肝癌的生长转移情况。处死荷瘤鼠,对其进行大体解剖。取移植瘤做冰冻切片,显微镜下观察移植瘤的组织结构特征。同时取移植瘤和腹水原代培养,移植瘤做免疫组织化学染色,分析肿瘤相关蛋白表达。结果:成功建立了双色荧光示踪肝癌动物模型。本模型可以模拟出肝癌侵袭、转移、癌性腹水等肝癌生物学特征。荧光成像可检测到肿瘤的生长及转移。冰冻切片可观察到肝癌组织的构建过程,肝癌细胞与宿主细胞的融合现象也清晰可见。免疫组化结果显示肿瘤相关蛋白PDGFRɑ、p STAT3、IRAK1、MMP9、N-RAS在肝癌组织中表达。结论:本方法建立的双色荧光示踪肝癌动物模型稳定可靠、易重复。该模型可直接观察到肿瘤组织重建过程中肝癌细胞与宿主细胞间的相互作用,进一步阐明了肿瘤微环境在肝癌发生发展中的作用。第二部分mi R-146b-5p影响肝癌细胞增殖、迁移能力的实验研究目的:检测mi R-146b-5p在肝癌细胞中的表达情况,研究其对肝癌细胞增殖、迁移能力的影响并初步探讨其发挥作用的机制。方法:Real-time RT-PCR方法检测肝癌细胞和正常肝细胞中mi R-146b-5p的表达水平。通过CCK-8实验、平板克隆形成实验、Transwell迁移实验、划痕实验检测观察过表达mi R-146b-5p对肝癌细胞的增殖、迁移能力的影响。应用生物学信息软件预测mi R-146b-5p可能作用的靶基因,并用Western blot方法进行靶基因验证。结果:mi R-146b-5p在肝癌细胞中较正常肝细胞出现低表达,转染mi R-146b-5p mimics后的肝癌细胞增殖、迁移能力下降,Western blot结果显示转染mi R-146b-5p mimics后的肝癌细胞IRAK1、p STAT3蛋白水平出现下调。结论:mi R-146b-5p在肝癌中的表达受抑制,且具有一定的抑制肝癌细胞增殖、迁移能力作用。其发挥抑瘤作用可能是通过调节IRAK1、p STAT3的表达水平实现的。
【关键词】：肝癌 动物模型 荧光示踪 活体成像 肿瘤转移 肝癌 miR-146b-5p 细胞增殖 迁移 靶基因
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-12
• 参考文献10-12
• 第一部分 双色荧光示踪肝癌模型的特性分析12-34
• 引言12
• 材料与方法12-19
• 结果19-29
• 讨论29-31
• 参考文献31-34
• 第二部分 miR-146b-5p影响肝癌细胞增殖、迁移能力的实验研究34-53
• 引言34
• 材料与方法34-41
• 结果41-48
• 讨论48-50
• 参考文献50-53
• 综述53-62
• 参考文献58-62
• 攻读硕士学位期间公开发表的论文62-63
• 中英文对照缩略词表63-64
• 致谢64-65

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本文编号：924764