表柔比星序贯NK细胞体外杀伤乳腺癌细胞的研究

发布时间：2017-09-29 04:30

  本文关键词：表柔比星序贯NK细胞体外杀伤乳腺癌细胞的研究

  更多相关文章： 乳腺癌 表柔比星 NK细胞 免疫治疗 协同作用

【摘要】：目的： 探讨乳腺癌细胞应用表柔比星（Epirubicin，EPI）前后NK细胞对其杀伤活性的变化，并对其机制进行初步探索。 方法： 选用ER、PR、HER-2表达情况不同的三种乳腺癌细胞系，即ER+、PR+、HER-2 乳腺癌细胞系MCF-7，ER 、PR 、HER-2+++乳腺癌细胞系SKBR-3和ER 、PR 、HER-2 乳腺癌细胞系MDA-MB-231。应用MTT法检测不同浓度的EPI作用于乳腺癌细胞和NK细胞的增殖抑制作用；应用钙黄绿素-AM释放法检测EPI（5.0μg/ml）序贯NK细胞对乳腺癌细胞杀伤的变化；应用流式细胞术检测EPI作用前后乳腺癌细胞表面NKG2D活化性配体(ULBP1、ULBP2和MICA)表达情况的变化；EPI序贯NK细胞作用于乳腺癌细胞时，ELISA法检测NK细胞分泌IFN-γ、TNF-的变化，流式细胞术检测NK细胞胞内穿孔素、颗粒酶B表达变化情况。 结果： EPI对乳腺癌细胞和NK细胞的增殖均呈现显著抑制作用，并随药物剂量增加和作用时间延长抑制率增加；NK细胞在体外对乳腺癌细胞亦存在杀伤作用，并随效靶比的增加杀伤率增加。选取5.0μg/ml EPI预处理12小时后，NK细胞对乳腺癌细胞的杀伤作用明显高于EPI未处理组及单独给药组，EPI序贯NK细胞对乳腺癌细胞的杀伤具有协同效应；经过EPI处理后，乳腺癌细胞表面NKG2D活化性配体（ULBP1、ULBP2、MICA）表达均显著增高，NKG2D配体增高可增强NK细胞的杀伤作用。EPI序贯NK细胞分泌IFN-γ、TNF-增多，进一步增强NK细胞的杀伤作用。EPI序贯NK细胞胞内穿孔素和颗粒酶B的表达水平降低，，需进一步进行研究。 结论： 1、EPI序贯NK细胞对乳腺癌细胞的杀伤具有协同作用。 2.其协同作用机制可能与以下两方面相关：(1)乳腺癌细胞表面NKG2D活化性配体表达上调；(2) NK分泌IFN-γ、TNF-增多。 3、EPI序贯NK细胞治疗方法适用于大多数类型的乳腺癌细胞。
【关键词】：乳腺癌 表柔比星 NK细胞 免疫治疗 协同作用
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 英文缩略词11-12
• 第1章 绪论12-14
• 第2章 综述14-21
• 2.1 NK 细胞的概述14-15
• 2.2 NK 细胞受体15-16
• 2.3 NK 细胞的抗肿瘤机制16-17
• 2.4 NK 细胞治疗肿瘤的基础研究17
• 2.5 NK 细胞治疗肿瘤的临床策略17-20
• 2.5.1 自体 NK 细胞治疗17-18
• 2.5.2 单克隆抗体介导的 NK 细胞杀伤肿瘤18-19
• 2.5.3 同种异体 NK 细胞过继性免疫治疗19
• 2.5.4 NK 细胞的基因修饰19-20
• 2.6 结论20-21
• 第3章 材料与方法21-30
• 3.1 实验材料21-23
• 3.1.1 细胞系21
• 3.1.2 实验试剂21
• 3.1.3 实验试剂配制说明21-22
• 3.1.4 流式抗体22-23
• 3.1.5 主要仪器23
• 3.2 实验方法23-29
• 3.2.1 人乳腺癌细胞的培养23-24
• 3.2.2 NK 细胞的体外诱导扩增培养24
• 3.2.3 NK 细胞表面免疫表型、活化性受体和抑制性受体的鉴定24
• 3.2.4 台盼蓝染色法检测乳腺癌细胞和 NK 细胞存活率24
• 3.2.5 EPI 对乳腺癌细胞增殖的抑制作用：MTT 法24-25
• 3.2.6 EPI 对 NK 细胞增殖的抑制作用：MTT 法25
• 3.2.7 EPI 序贯 NK 细胞对乳腺癌细胞的杀伤实验：钙黄绿素-AM 释放法25-27
• 3.2.8 检测 EPI 作用后乳腺癌细胞表面活化性受体 NKG2D 的配体表达的变化：流式细胞术27
• 3.2.9 检测 NK 细胞分泌 IFN-γ、TNF- 的变化：ELISA 法27-28
• 3.2.10 检测 NK 细胞胞内穿孔素和颗粒酶 B 表达的变化：流式细胞术28-29
• 3.3 统计学分析29-30
• 第4章 结果30-41
• 4.1 NK 细胞乳腺癌供者临床资料30-31
• 4.2 NK 细胞表面免疫表型及活化性受体的鉴定31
• 4.3 EPI 对乳腺癌细胞增殖的抑制作用31-32
• 4.4 EPI 对 NK 细胞增殖的抑制作用32-33
• 4.5 EPI 序贯 NK 细胞对乳腺癌细胞的杀伤实验33-34
• 4.6 EPI 作用后乳腺癌细胞表面 NK 细胞活化性受体 NKG2D 配体表达的变化34-37
• 4.7 NK 细胞分泌 IFN-γ、TNF- 浓度的变化37
• 4.8 NK 细胞胞内穿孔素和颗粒酶 B 表达的变化37-41
• 第5章 讨论41-45
• 第6章 结论45-46
• 参考文献46-51
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果51-52
• 致谢52

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 邵志敏,刘刚;乳腺癌器官亲嗜性转移的分子机制[J];外科理论与实践;2004年02期

2 程广源;乳腺癌标志物的临床意义[J];癌症进展;2004年05期

3 王蓓,郑昭景,徐瑞龙,王朝明,李曙光,徐熙善,厉军,骆健生,丁丰盛,洪中武;乳腺癌耐药蛋白在乳腺癌和乳腺良性病变组织中的表达[J];中国肿瘤;2005年05期

4 袁們,徐兵河;表皮生长因子受体抑制剂在乳腺癌治疗中的研究[J];癌症进展;2005年03期

5 ;可减少乳腺癌发生的食物[J];家庭护士;2006年03期

6 蔡春友;姚智;;乳腺癌细胞核因子κB活化及其在增殖与演化过程中的作用[J];中国综合临床;2006年05期

7 杜丽莉;韩存芝;刘秀英;荆洁线;赵先文;田保国;谢燕红;;血清瘦素水平及体质指数与乳腺癌发生的相关性研究[J];肿瘤研究与临床;2006年05期

8 吴荣兴;;32例炎性乳腺癌的综合治疗[J];肿瘤研究与临床;2006年05期

9 林授;林德馨;;人绒毛膜促性腺激素与乳腺癌的研究进展[J];医学综述;2008年07期

10 任丽;陈瑛;李丁;;血清胰岛素样生长因子-1检测对乳腺癌的诊断价值[J];中国肿瘤临床;2008年09期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 李树玲;;乳腺癌生物学及临床研究进展[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议教育集[C];2006年

2 殷玉琨;李静蔚;;乳腺癌中医辨证与预后因子相关性研究概况[A];第十一届全国中医及中西医结合乳腺病学术会议论文集[C];2009年

3 陈前军;司徒红林;林毅;;早期乳腺癌系统辅助治疗概述[A];第十一届全国中医及中西医结合乳腺病学术会议论文集[C];2009年

4 张利红;韩宏丽;张晓静;王春凤;张琦炜;;ER PR C-erbB-2 P~(53)的表达与乳腺癌组织学分级[A];第一届全国中西医结合乳腺疾病学术会议论文汇编[C];2002年

5 陈衍;刘文超;秦鸿雁;韩骅;;人脂肪酸合成酶启动子对乳腺癌细胞的靶向转录活性分析[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

6 刘蕾;王斌;糜漫天;张乾勇;;重庆市妇女血浆脂肪酸组成谱及其与乳腺癌的相关性研究[A];中国西部第六届营养与健康学术会议论文集[C];2011年

7 ;不同分子量肝素对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响(英文)[A];第十一届全国青年药学工作者最新科研成果交流会论文集[C];2012年

8 刘卫国;盛雅娟;蓝天;金洪传;毛伟敏;王晓稼;;重楼皂苷Ⅱ对乳腺癌细胞的生长抑制作用[A];2012·中国医师协会中西医结合医师大会第三次会议论文集[C];2012年

9 董良;李海金;;乳腺癌新型分子靶向药物治疗研究进展[A];2013年第六届国家级分子靶点药物治疗新进展学习班暨浙江省肿瘤化疗学术年会论文集[C];2013年

10 汲振余;李懿;范丹丹;;膜骨架蛋白4.1N负调控乳腺癌细胞的粘附、迁移及侵袭[A];2013医学前沿论坛暨第十三届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2013年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 詹建;乳腺癌饮食 两个时期不一样[N];中国中医药报;2006年

2 辛君;乳腺癌扩散基因“浮出水面”[N];大众卫生报;2009年

3 王乐　沈基飞;我科学家发现导致乳腺癌耐药的新标志物[N];科技日报;2011年

4 刘霞;一种天然分子能阻止乳腺癌恶化[N];科技日报;2011年

5 通讯员 王乐　沈基飞;乳腺癌耐药新标志物被发现[N];光明日报;2011年

6 伊遥;乳腺癌药新旧交替[N];医药经济报;2012年

7 记者 郑晓春;以发现可促使乳腺癌细胞扩散的蛋白[N];科技日报;2007年

8 李国军;三地肿瘤专家共商乳腺癌治疗良策[N];中国医药报;2007年

9 实习生 蒋洪涛;激素治疗应慎重,别让乳腺癌瞄上你[N];科技日报;2010年

10 谭毅挺 佘晓蓉 李虹辉;靠自摸防查早期乳腺癌悬！[N];大众卫生报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 聂建云;组蛋白去乙酰化调控对乳腺癌细胞增殖周期影响的研究[D];昆明医学院;2010年

2 吴艳萍;细丝蛋白A调控表皮生长因子受体活性在乳腺癌发病中的作用[D];河北医科大学;2010年

3 何文山;细胞周期蛋白E同乳腺癌的预后及分子靶向治疗相关性的实验研究[D];华中科技大学;2007年

4 王s

本文编号：940010