AG490对甲状腺髓样癌TT细胞放射敏感性的研究

发布时间：2017-09-30 06:16

  本文关键词：AG490对甲状腺髓样癌TT细胞放射敏感性的研究

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【摘要】：目的甲状腺髓样癌(medullary thyroid carcinoma, MTC)是起源于甲状腺滤泡旁分泌细胞的恶性肿瘤。甲状腺滤泡旁分泌细胞不能吸收碘,而且对射线不敏感,因此放疗效果不佳。本文通过对AG490干预下,甲状腺髓样癌TT细胞体外培养的情况进行研究,探讨AG490在阻断JAK-STAT信号通路及增加放射敏感性中的作用,为临床上进一步治疗甲状腺髓样癌提供丰富的的理论基础。方法1.MTT法检测甲状腺髓样癌TT细胞在递增浓度：0、25、50、100μmol/L AG490干预下第1、2、3、4、5 d不同时间点的吸光度值,以判断细胞增殖情况。2.流式细胞检测技术检测甲状腺髓样癌TT细胞在递增浓度0.25, 50,100μmol/L AG490干预48h后细胞的凋亡情况。3. Western blot法检测甲状腺髓样癌TT细胞在不同浓度AG490干预24h后,JAK2、p-STAT3、Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。4.以50 μmol/L浓度AG490的培养基体外培养甲状腺髓样癌TT细胞作为实验组,以不含AG490的普通培养基作为对照组对细胞进行培养。细胞贴壁后,采用0、2、4、6、8、10 Gy的递增单吸收剂量进行照射,24h后显微镜下计数,计算克隆接种率(planting efficiency, PE)、存活分数(survival fraction, SF),并采用GraphPad Prism 5软件拟合细胞存活曲线。根据细胞存活曲线计算相关放射生物学参数射线为2 Gy时的存活分数(SF2)、平均致死剂量(DO)、准阈剂量(Dq)、外推数(N)、DO时放射增敏比(SER DO)和Dq时放射增敏比(SERDq)等参数。5.对甲状腺髓样癌TT细胞采取0、25、50、100 μmol/L的AG490进行干预,并采取4Gy剂量进行照射,通过western blot实验和Quantity one软件测定每组细胞JAK2和p-Stat3含量。结果增殖率检测：与0 μmol/L相比,25μLmol/L、50μmol/L和100 μmol/L组均可见TT细胞受到一定程度的抑制,随着浓度的增加、时间的延长,AG490对甲状腺髓样癌TT细胞的抑制作用逐渐增大。凋亡率检测显示：0μmol/L、25 μmol/L、50μmol/L和100μmol/L浓度组细胞凋亡率分别为4.86±0.79%、15.24±1.00%、33.11±2.40%、64.47±2.29%。凋亡率随着AG490药物浓度的增加而逐渐增加。蛋白含量检测：与0μmol/L比较,JAK2、p-Stat3和Bcl-2蛋白表达量随着浓度的增高逐渐降低,Bax表达增高。经Poisson关联性分析JAK2和p-Stat3呈正相关,r=0.67; JAK2和Bcl-2呈正相关,r=0.79; p-Stat3和Bcl-2呈正相关,r=0.70; JAK、p-Stat3、Bcl-2和Bax均呈负相关,r=-0.44、-0.42、-0.40。放射敏感性实验结果显示：对照组和实验组细胞存活分数(s urvival fraction, SF)均随着照射剂量的增加而降低,且药物组降低较前者更显著。6种放射生物学参数之间比较,实验组较对照组差别有统计学意义。在给予4Gy剂量照射后,0、25、50和100μmol-L浓度组JAK2分别为0.94±0.09、0.78±0.02、0.31±0.01、0.15±0.03, p-Stat3分别为0.94±0.83、0.85±0.0.13、0.43±0.03、0.23±0.02。与未照射组相比,两种蛋白表达均下降,且当AG490浓度≥50μmol/L时差异具有显著性P0.05)。结论随着AG490浓度的增加、作用时间的延长,对体外培养的甲状腺髓样癌TT细胞抑制作用逐渐增加,细胞凋亡率逐渐增加,进一步说明细胞增殖受到抑制。在给予单剂量照射后发现细胞生存率随剂量增加逐渐降低,含药组更明显,且放射生物学参数也相应变化。蛋白检测表明JAK2、p-Stat3、Bcl-2蛋白的表达随着药物浓度的增加逐渐降低,而Bax逐渐升高。表明AG490可以提高TT细胞的放疗敏感性,并可以下调细胞增殖信号通路蛋白JAK2、p-Stat3和Bcl-2的表达,上调凋亡蛋白Bax的表达。
【关键词】：AG490 甲状腺髓样癌 放射敏感性
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R736.1
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-17
• 1 材料和方法17-26
• 2 结果26-32
• 3 讨论32-35
• 全文总结35-36
• 参考文献36-40
• 文献综述40-49
• 参考文献46-49
• 致谢49-50
• 攻读硕士期间发表的文章50

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本文编号：946599