人天冬氨酸-β-羟化酶基因修饰树突状细胞介导CTLs对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用

发布时间：2017-09-30 22:34

  本文关键词：人天冬氨酸-β-羟化酶基因修饰树突状细胞介导CTLs对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用

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【摘要】：目的:探索含人天冬氨酸-β-羟化酶(aspartate-β-hydroxylase,ASPH)基因的重组腺病毒转导未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)对肝癌细胞系SMMC-7721的体外杀伤效应。方法:C57BL/6小鼠骨髓分离培养DCs,重组腺病毒(Ad-ASPH-IRES2-EGFP)感染未成熟DCs制备DCs疫苗,分为三组:Ad-ASPH-IRES2-EGFP感染未成熟DCs组(DCs-ASPH组)、Ad-IRES2-EGFP感染未成熟DCs组(DCs-GFP组)和未成熟DCs组(imDCs组),各组DCs中ASPH蛋白的表达采用Western blot检测、ASPH mRNA的表达采用real-time PCR检测,流式细胞术检测成熟DCs表型变化。分离同一来源的小鼠脾T淋巴细胞,流式细胞仪测定其表面特异性分子表达量,DCs疫苗诱导产生CTLs后与SMMC-7721细胞混合培养,采用CCK-8法、流式细胞术检测CTLs对SMMC-7721细胞的杀伤作用,ELISA检测CTLs上清液中IFN-γ含量。结果:成功培养出DCs并制备DCs疫苗,ASPH蛋白和ASPH mRNA在DCs-ASPH组中高表达,DCs-ASPH组DCs细胞表面标志物CD80、MHCⅡ和CD11c显著高于DCs-GFP组和imDCs组。总T淋巴细胞纯度CD3为79.240%,CD4为43.230%,CD8为28.930%,DCs-ASPH诱导的CTLs组SMMC-7721细胞的增殖能力显著低于其它组、凋亡率高于其它组,DCs-ASPH诱导的CTLs上清液中IFN-γ含量高于其它组,差异具有统计学意义(P?0.05)。结论:Ad-ASPH-IRES2-EGFP修饰DCs疫苗体外诱导产生的CTLs对SMMC-7721细胞具有显著的杀伤作用。
【关键词】：天冬氨酸-β-羟化酶 树突状细胞 SMMC-7721细胞 共培养
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-13
• 参考文献11-13
• 第一部分 Ad-ASPH-IRES2-EGFP致敏DCs疫苗的制备及鉴定13-26
• 1 材料及方法13-19
• 2 结果19-23
• 3 讨论23-25
• 参考文献25-26
• 第二部分 DCs疫苗诱导产生CTLs体外杀伤SMMC-7721 细胞26-39
• 1 材料与方法26-31
• 2 结果31-35
• 3 讨论35-38
• 参考文献38-39
• 全文总结39-40
• 文献综述40-49
• 参考文献46-49
• 致谢49-50
• 攻读硕士学位期间发表的论文50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 Yu-Peng Hong;Zi-Duo Li;Pankaj Prasoon;Qi Zhang;;Immunotherapy for hepatocellular carcinoma: From basic research to clinical use[J];World Journal of Hepatology;2015年07期

2 ;Bone marrow-derived dendritic cells pulsed with tumor lysates induce anti-tumor immunity against gastric cancer ex vivo[J];World Journal of Gastroenterology;2008年46期

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本文编号：950834