LCN-2对卵巢癌SKOV3细胞增殖及迁移的影响
本文关键词：LCN-2对卵巢癌SKOV3细胞增殖及迁移的影响
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【摘要】：卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,病死率极高,严重威胁着广大妇女的身心健康。由于缺乏有效的筛查手段,多数患者确诊时已处于晚期。在卵巢癌有明显症状时血清CA125、CA199等可作为监测病情的肿瘤抗原标记物,其敏感性较高,但特异性较差。为此,我们建立卵巢癌细胞模型寻找特异性肿瘤抗原标记物,并检测其在卵巢癌中的表达情况、以及对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响,为今后进一步探讨卵巢癌发病机制提供实验依据,以期为卵巢癌的防治提供新的思路和靶点。目的:脂质运载蛋白-2(lipocalin-2,LCN-2)属于脂质运载蛋白家族的第2号成员,LCN-2的上调与肝癌,乳腺癌,卵巢癌等多种人类肿瘤相关。然而,LCN-2在肿瘤细胞中的生物学作用还不是很清楚。本研究通过观察LCN-2在四种卵巢癌细胞系中的表达情况,并使用稳定过表达LCN-2的方法检测其对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响,为进一步研究LCN-2在卵巢癌细胞中的作用机制提供前期实验依据。方法:应用RT-qPCR技术在mRNA水平上检测四种卵巢癌细胞系(CAOV3,ES2,OVCAR3,SKOV3)中LCN-2的表达情况;应用稳定转染法观察过表达LCN-2对卵巢癌SKOV3细胞生长的影响;应用MTT细胞增殖实验检测过表达LCN-2对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响;应用细胞划痕实验检测过表达LCN-2对卵巢癌SKOV3细胞迁移的影响。结果:1RT-qPCR结果显示:在mRNA水平上LCN-2的表达在四种卵巢癌细胞系中由高到低的趋势是:在CAOV3和OVCAR3呈高表达,在SKOV3表达较弱,在ES2表达最弱,差异具有统计学意义(P0.05)。2成功构建LCN-2稳定过表达的SKOV3细胞克隆。稳定转染空载体或目的质粒的SKOV3细胞系后,用1200μg/mlG418进行筛选,约四周后细胞克隆形成。RT-qPCR和Westernblot方法检测结果显示,稳定转染LCN-2基因的SKOV3细胞中LCN-2蛋白表达量均显著高于未转染组,差异具有统计学意义(P0.05)。镜下观察发现SKOV3细胞克隆和稳定转染LCN-2后的SKOV3细胞克隆形态无明显变化。3MTT细胞增殖实验绘制细胞生长曲线,结果显示:过表达LCN-2与对照组比较,对卵巢癌SKOV3细胞增殖具有促进作用,结果有统计学差异(P0.05)。4划痕实验结果显示:过表达LCN-2与对照组相比,明显促进了卵巢癌SKOV3细胞的迁移,结果有统计学差异(P0.05)。结论:1成功构建了pcDNA/mycHis-LCN-2表达载体。2LCN-2在不同的卵巢癌细胞系中的表达有差异。3构建LCN-2稳定过表达的细胞克隆。4过表达LCN-2对卵巢癌SKOV3细胞的增殖具有促进作用。5过表达LCN-2对卵巢癌SKOV3细胞的迁移具有促进作用。
【关键词】：LCN-2 卵巢癌细胞 细胞增殖 细胞迁移 SKOV3细胞
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31
【目录】：
- 中文摘要4-6
- 英文摘要6-9
- 英文缩写9-10
- 前言10-11
- 材料与方法11-23
- 结果23-26
- 附图26-31
- 讨论31-34
- 结论34-35
- 参考文献35-38
- 综述 脂质运载蛋白-2 的研究进展38-47
- 参考文献43-47
- 致谢47-48
- 个人简历48
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