人喉癌移植瘤成纤维细胞的培养、鉴定及上皮间质转化相关来源分析

发布时间：2017-10-01 13:10

  本文关键词：人喉癌移植瘤成纤维细胞的培养、鉴定及上皮间质转化相关来源分析

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【摘要】：研究背景肿瘤的发生、生长和侵袭转移已不能简单归因于肿瘤细胞的基因突变和肿瘤细胞的失控生长,肿瘤微环境中的多种细胞成分,尤其是肿瘤相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblasts, CAFs)对肿瘤的生长、侵袭甚至癌变起到至关重要的调控作用,针对CAFs的靶向治疗已经成为当前抗肿瘤研究新的热点。弄清CAFs的起源有利于我们更好的设计靶向治疗策略,但是CAFs的起源至今尚未明确。文献报道的CAFs可能的重要起源之一便是肿瘤细胞能够通过上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)形成促进自身生长的CAFs,而关于喉癌组织中的CAFs的起源目前尚未见报道,至于喉癌细胞能否通过EMT这条重要途径形成CAFs也不明确。研究目的验证喉癌裸鼠移植瘤模型中的喉癌细胞能否通过EMT生成促进自身生长的CAFs。研究方法1、将喉癌HEp-2细胞系注射到免疫缺陷的BALB/c裸鼠皮下建立喉癌小鼠移植瘤模型；2、将所生长的小鼠皮下瘤体取出病理检查,并对瘤体中的CAFs进行原代培养、纯化及相差显微镜观察；3、对纯化出的CAFs进行体外免疫荧光、增殖、迁移、侵袭试验及体内促肿瘤生长功能学鉴定；4、对鉴定后的CAFs、NFs及喉癌细胞进行核型分析,即上皮间质转化相关来源分析；5、原代培养的癌旁正常成纤维细胞(Normal fibroblasts, NFs)作为实验对照。研究结果1、喉癌HEp-2细胞系在BALB/c裸鼠皮下成功建立喉癌移植瘤模型；2、所生长的瘤体为典型的喉鳞状上皮癌,瘤体中的CAFs被成功原代培养及纯化；3、免疫荧光检查发现CAFs及NFs均为波形蛋白(vimentin) (?)日性而广谱角蛋白(pan-CK)阴性,CAFs还进一步为α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和成纤维细胞活化蛋白(Fap)两种CAFs特异性蛋白阳性；与NFs相比,CAFs对喉癌细胞系具有更强的促进增殖、迁移、侵袭及成瘤能力(P0.05)；4、核型分析检查发现,CAFs及NFs均为典型的小鼠染色体核型特征(38+XY),与喉癌HEp-2细胞的肿瘤核型截然不同。研究结论喉癌裸鼠移植瘤模型中的CAFs不是喉癌细胞通过EMT生成的,而是小鼠来源的,具体来源尚待进一步研究。
【关键词】：肿瘤相关成纤维细胞 起源 喉肿瘤 上皮间质转化
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.65
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 缩略词表11-14
• 1 引言14-16
• 2 第一部分人喉癌移植瘤成纤维细胞的培养、纯化及鉴定16-50
• 2.1 材料与方法16-23
• 2.2 结果23-43
• 2.3 讨论43-49
• 2.4 结论49-50
• 3 第二部分人喉癌移植瘤成纤维细胞的上皮间质转化相关来源分析50-63
• 3.1 材料与方法50-53
• 3.2 结果53-60
• 3.3 讨论60-62
• 3.4 结论62-63
• 4 全文总结63-64
• 5 全文创新点64-65
• 参考文献65-71
• 综述71-84
• 参考文献77-84
• 作者简历及在学期间所取得的科研成果84

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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本文编号：953612