肾癌中PDGF-B的表达抑制肿瘤的生长和转移

发布时间：2017-10-04 02:09

  本文关键词：肾癌中PDGF-B的表达抑制肿瘤的生长和转移

  更多相关文章： 血小板衍生生长因子-B 周细胞 血管生成 肿瘤 靶向治疗 肾细胞癌

【摘要】：目的:血小板衍生生长因子(PDGF)-B的表达能促进血管壁附近的周细胞募集,从而增加其结构上的稳定性。周细胞募集所致覆盖率增加可能导致抗血管新生药物产生耐药,因而,联合针对内皮细胞与周细胞联合靶向治疗已经提出。但是,周细胞和内皮细胞是调节血管生成、稳定与重塑的中心环节,两者之间的相互作用是非常复杂的。在我们研究中,重点评估了由PDGF-B介导的周细胞募集这一作用对肾细胞癌(RCC)肿瘤生长和进展的影响。方法:1.将含有PDGF-B基因的质粒转染到ACHN细胞系(人类肾癌细胞系之一),用Western-blotting来验证PDGF-B在ACHN细胞系的过表达。2.MTT实验来对转染PDGF-B的ACHN细胞OD值进行测量,从而分析肿瘤细胞ACHN增殖情况。3.用Western-blotting来测量VSMCs(壁细胞)和HUVECs(内皮细胞)细胞的磷酸化PDGFR-β(p-PDGFR-β)表达水平。4.相关实验来分析ACHN细胞分泌PDGF-B对VSMCs(周细胞)和HUVECs(内皮细胞)功能的影响。FCM方法分析PDGF-B对VSMCs和HUVECs两种细胞周期分布的不同影响;Transwell实验检测PDGF-B对VSMCs和HUVECs两细胞的迁移能力影响;管腔形成实验来检测PDGF-B对VSMCs和HUVECs管腔形成能力影响。5.将PDGF-B转染的和空转染的ACHN细胞注射到小鼠的左侧腹股沟,通过每3天测量肿瘤直径来进行实验组与对照组肿瘤大小的比较。6.使用免疫组织化学(抗Ki-67)和组织形态学(HE染色)评估小鼠移植瘤的肿瘤细胞增殖和进展(浸润和转移)。7.Microarray探讨Van Andel研究所中肾透明细胞癌患者PDGF-B表达对预后的影响。结果:1.Western-blotting结果显示,经过PDGF-B基因转染的ACHN细胞PDGF-B表达明显上调。2.MTT测定表明PDGF-B转染的ACHN与空转染的ACHN细胞的OD值之间没有显著差异(P0.05)。3.与PDGF-B过表达培养基共培养后,VSMCs中可检测出p-PDGFR-β表达的上调。4.FCM分析表明,PDGF-B过表达组中,VSMCs往往更多倾向于S和G2/M期。PDGF-B过表达组中,VSMCs的迁移能力显著(P0.001)大于另外两组(加入空转染ACHN细胞培养基;加入PDGF-B抑制剂的ACHN培养基)。且只有在PDGF-B过表达的培养基中VSMCs方具有管腔形成能力。5.PDGF-B转染的肾癌细胞ACHN的移植瘤的肿瘤平均体积小于对照组(P=0.028)。6.免疫组化表明:PDGF-B过表达组的小鼠肿瘤细胞的Ki-67阳性表达细胞明显少于对照组(P=0.019)。PDGF-B过表达的肿瘤,只有一只小鼠存在肿瘤周围的软组织浸润。而对照组有更多转移或浸润现象发生。7.Microarray分析表明:PDGF-B高表达组患者预后明显优于低PDGF-B组(P0.001)。结论:1.体外实验中,肿瘤细胞PDGF-B过表达增加周细胞上PDGFR-β表达水平,通过PDGF-B/PDGFR-β信号通路增加周细胞增殖、迁移和管形成能力。2.动物实验表明PDGF-B过表达可以抑制肿瘤生长以及肿瘤细胞增殖。由肿瘤细胞分泌PDGF-B可能通过增加周细胞募集从而促使肿瘤血管正常化而减少肿瘤转移和局部浸润的发生。3.我们对肾癌患者的Microarray研究分析表明,PDGF-B高表达组患者预后明显优于低PDGF-B组。因此针对周细胞的靶向治疗在肿瘤治疗中存在争议,需要进一步深入研究周细胞在肾癌中的复杂作用。
【关键词】：血小板衍生生长因子-B 周细胞 血管生成 肿瘤 靶向治疗 肾细胞癌
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 1 对象和方法15-25
• 1.1 实验对象15-18
• 1.1.1 实验细胞系及细胞15
• 1.1.2 实验试剂15-17
• 1.1.3 实验设备17-18
• 1.2 实验方法18-25
• 1.2.1 体外实验18-23
• 1.2.2 动物实验23-24
• 1.2.3 Microarray检测PDGF-B表达与预后关系的研究24-25
• 1.3 统计学方法25
• 2 结果25-35
• 2.1 体外实验25-31
• 2.1.1 肾癌细胞中PDGF-B的基础表达量25
• 2.1.2 PDGF-B转染ACHN后PDGF-B的过表达检测25-26
• 2.1.3 PDGF-B转染的ACHN细胞的MTT增殖实验26-27
• 2.1.4 内皮细胞与周细胞共培养后p-PDGFR-β 表达量检测27
• 2.1.5 PDGF-B对周细胞和内皮细胞细胞周期影响27-29
• 2.1.6 过表达PDGF-B肾癌细胞培养液对血管周细胞和内皮细胞迁移能力的影响29-30
• 2.1.7 过表达PDGF-B肾癌细胞对血管对周细胞和内皮细胞管腔形成能力的影响30-31
• 2.2 动物实验31-33
• 2.2.1 PDGF-B对肿瘤生长的影响31-32
• 2.2.2 免疫组化检测PDGF-B对小鼠移植瘤肿瘤细胞增殖能力的影响32
• 2.2.3 HE染色检测PDGF-B对肿瘤浸润和转移的影响32-33
• 2.3 Microarray研究肾癌患者PDGF-B的表达对预后的影响33-35
• 3 讨论35-39
• 结论39-40
• 参考文献40-44
• 发表论文和参加科研情况说明44-45
• 综述 周细胞在肿瘤血管生成中的作用45-61
• 综述参考文献56-61
• 致谢61

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本文编号：968000