7-二氟甲氧基-5,4’-二—正辛烷氧基异黄酮对SGC-7901胃癌干样细胞EMT和侵袭的影响

发布时间：2017-10-04 22:00

  本文关键词：7-二氟甲氧基-5,4’-二—正辛烷氧基异黄酮对SGC-7901胃癌干样细胞EMT和侵袭的影响

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【摘要】：目的：研究7-二氟甲氧基-5,4'-二-正辛烷氧基异黄酮(7-difluoromhoxyl-5,4'-di-n-octylgenistein, DFOG)抑制人胃癌SGC-7901细胞系干样细胞(gastric cancer stem-like cells, GCSLCs)特性和逆转上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)作用及其机制。方法：采用国家发明专利申请书(国家发明专利申请号为201210591131.2)中的方法合成DFOG,并行1H和13C核磁共振确证化学结构。体外培养人胃癌SGC-7901细胞系细胞。应用干细胞条件培养基悬浮培养法富集和扩增球形成细胞(sphere forming cells, SFCs)。与亲本细胞对照,应用肿瘤球形成试验、划痕法、Transwell侵袭试验和western blot分别检测球形成率、细胞迁移率、细胞侵袭率和CD133、CD44和ALDH1蛋白表达水平,鉴别SFCs是否具有GCSLCs特性以及测定不同浓度DFOG(1.0、3.0、10.0μmol/mL)对GCSLCs特性的影响。Western blot分析上皮细胞标志物(E-cadherin)和问充质细胞标志物(N-cadherin)蛋白表达评估EMT表型和DFOG逆转EMT表型作用。对比分析GCSLCs和亲本细胞致癌性转录因子Foxml和EMT相关转录因子Twistl蛋白表达状态,通过检测DFOG、 FoxMl siRNA转染及两者联合处理对FoxMl和Twistl蛋白表达以及GCSLCs特性和EMT表型的影响,探讨DFOG作用机制。结果：1.利用专利申请书中的方法合成并得到DFOG 500.0 mg,并利用核磁共振确证其化学结构；2.人胃癌SGC-7901细胞系SFCs较亲本细胞具有更高球形成率(P0.05)、更强细胞迁移和侵袭能力(P0.05)和更高CD133、CD44和ALDH1蛋白表达水平P0.05)。3.与亲本细胞相比,SFCs N-cadherin表达上调(P0.05)、E-cadherin蛋白表达下调(P0.05)。4.DFOG(1.0、3.0、10.0μmol/mL)以剂量依赖方式抑制GCSLCs球形成(P0.05)、体外迁移和侵袭能力P0.05),并下调CD133、CD44和ALDH1蛋白表达(P0.05)。5.DFOG(1.0、3.0、10.0μmol/mL)降低GCSLCs N-cadherin蛋白表达水平(P0.05),并上调E-cadherin蛋白表达(p0.05)。6.与亲本细胞相比, GCSLCs高表达FoxM1蛋白和Twist1蛋白(P0.05)。7.DFOG(1.0、3.0、10.0μmol/mL)抑制GCSLCs FoxMl蛋白和Twist1蛋白表达(P0.05)。8. FoxM1 siRNA转染与DFOG协作降低GCSLCs FoxMl和Twist1蛋白表达水平P0.05)。9. FoxM1 siRNA增强DFOG抑制GCSLCs球形成能力(P0.05)、迁移和侵袭能力(P0.05)、降低CD133、CD44和ALDH1蛋白表达水平(P0.05)和调节N-cadherin和E-cadherin蛋白表达作用(P0.05)。结论：1.使用专利申请书方法得到了DFOG,并确证其化学结构。2.人胃癌SGC-7901细胞系SFCs具有GCSLCs特性和EMT表型。3. DFOG具有抑制GCSLCs特性和逆转EMT表型作用。4. DFOG抑制GCSLCs特性作用涉及其降低GCSLCs FoxMl蛋白表达水平。5. DFOG逆转EMT表型作用与其抑制Twist1蛋白表达相关。
【关键词】：胃癌 胃癌干细胞 胃癌干样细胞 7-二氟甲氧基-5 4'-二-正辛烷氧基异黄酮 FoxM1
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 1 引言11-14
• 2 材料与方法14-19
• 2.1 材料14-16
• 2.2 实验方法16-19
• 3 结果19-56
• 3.1 DFOG的合成及结构确证19-21
• 3.2 GCSLCs的富集、扩增与鉴别21-31
• 3.3 DFOG对GCSLCs功能及特性的影响31-39
• 3.4 FoxM1下调参与DFOG抑制GCSLCs特性39-56
• 4 讨论56-61
• 5 结论61-62
• 参考文献62-70
• 附录1：英文缩略词索引70-71
• 附录2：综述71-80
• 参考文献75-80
• 攻读硕士学位期间的主要成果80-81
• 致谢81-82

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本文编号：973063