miR-30a对结直肠癌细胞侵袭和转移的影响及其相关分子机制的初步研究

发布时间：2017-10-05 09:15

  本文关键词：miR-30a对结直肠癌细胞侵袭和转移的影响及其相关分子机制的初步研究

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【摘要】：目的研究mi R-30a对结直肠癌细胞侵袭迁移的影响并初步探讨其可能的分子机制。方法1 mi R-30a的相对表达量采用茎环实时荧光定量PCR技术检测不同转移能力的结直肠癌细胞株中mi R-30a的相对表达量,初步分析其与结直肠癌的转移是否相关。2 mi R-30a对结直肠癌细胞侵袭迁移的影响1)构建pre-mi R-30a过表达的慢病毒颗粒,并感染mi R-30a表达量较低的SW620。荧光显微镜观察转染情况,实时荧光定量PCR检测转染效率。2)利用划痕实验检测过表达mi R-30a后SW620的迁移特性,Transwell小室侵袭实验检测其侵袭性。3 mi R-30a抑制结直肠癌侵袭迁移的分子机制1)mi R-30a作用靶点的预测以has-mi R-30a为检索词,利用数据库Targetscan、mi Randa(micro RNA.org)、mi RDB对mi R-30a进行靶基因的预测,挑选软件交集较多以及预测值较高的作为靶点,即AEG-1/MTDH作为研究对象。2)Western blot检测过表达mi R-30a后AEG-1/MTDH蛋白表达水平,实时荧光定量PCR技术检测相应AEG-1/MTDHm RNA的相对表达量。4统计学分析采用SPSS17.0软件进行统计学分析,实验数据均以均值±标准差(x±s)表示,采用两组独立样本t检验进行两组间差异的比较,采用单因素方差分析进行多组计量间资料比较,采用LSD-t检验进行两组间资料的比较,检验水准α=0.05。结果1.相对于SW480(1.00±0.00)而言,mi R-30a在Caco2中的相对表达量为0.88±0.084,差异没有统计学意义(t=2.547,p=0.126);在转移性细胞系(HT-29、HCT116和SW620)中的相对表达量均显著降低,分别是0.74±0.081;0.37±0.055;0.29±0.040,差异均具有统计学意义(t HT-29=5.600,P=0.030;t HCT-116=19.92,p=0.002;t SW620=30.74,p=0.001)其中在高度恶性的SW620细胞系中表达最低。2.生物学软件分析mi R-30a可能的靶点是AEG-1/MTDH;在SW620中转染pre-mi R-30a后AEG-1/MTDHm RNA和蛋白的表达量明显下降,差异具有统计学意义。结论1.mi R-30a在结直肠癌细胞中低表达,而且低表达可能预示着结直肠癌的转移。2.mi R-30a可能通过下调AEG-1/MTDH来抑制结直肠癌细胞的侵袭和转移。
【关键词】：miR-30a AEG-1/MTDH 侵袭 转移 结直肠癌细胞
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文缩略表10-11
• 引言11-15
• 第一部分miR-30a在不同转移能力结直肠癌细胞中的表达15-24
• 1 材料及仪器15-17
• 2 实验方法17-21
• 3 实验结果21-22
• 4 小结22-23
• 5 结论23-24
• 第二部分miR-30a参与结直肠癌侵袭迁移的相关实验研究24-30
• 1 材料及仪器24
• 2 实验方法24-26
• 3 实验结果26-29
• 4 小结29
• 5 结论29-30
• 第三部分miR-30a抑制结直肠癌细胞侵袭和迁移的分子机制30-39
• 1 材料及仪器30-31
• 2 实验方法31-35
• 3 实验结果35-37
• 4 小结37-38
• 5 结论38-39
• 讨论39-42
• 结论42-43
• 参考文献43-46
• 综述 microRNA在结直肠癌转移中的研究进展46-68
• 参考文献58-68
• 个人简历、在学期间发表的学术论文68-69
• 致谢69

【共引文献】

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1 伍威;张海平;商建;邹金艳;易三凤;夏冰;邓长生;林军;;结直肠癌中巨噬细胞加帽蛋白的表达及其临床病理学意义[J];武汉大学学报(医学版);2014年05期

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本文编号：975970