慢病毒介导NIBP基因沉默对人结肠癌细胞上皮间质转化的影响

发布时间：2017-10-07 12:17

  本文关键词：慢病毒介导NIBP基因沉默对人结肠癌细胞上皮间质转化的影响

  更多相关文章： 结肠 核转录因子-κB诱导激酶和IκB激酶连接蛋白 肿瘤坏死因子-α 上皮-间质转化 慢病毒

【摘要】：目的 通过研究慢病毒介导的核转录因子-κB诱导激酶和IκB激酶连接蛋白(NIK and IKKβ binding protein, NIBP)基因沉默后对人结肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)的影响,初步探讨NIBP与结肠癌细胞侵袭转移的关系,以及可能涉及的机制。方法 利用DNA重组技术,进行设计并构建人NIBP基因的Lenti-EGFP-NIBP-miR慢病毒载体,以及无关序列的Lenti-EGFP慢病毒载体感染人结肠癌HCT116细胞株,并用杀稻瘟菌素(blasticidin, BSD)进行筛选稳定转染低表达NIBP的单克隆HCT116细胞,分别为转染组(NIBP-RNAi组)和阴性对照组(NC组),而未予转染处理的HCT116细胞则为空白对照组(CON组)。将实验分为非TNF-α组和TNF-α组两大组,非TNF-α组包括转染组(NIBP-RNAi) 、阴性对照组(NC)、空白对照组(CON), TNF-α组包括转染组+TNF-α(NIBP-RNAi+) 、阴性对照组+TNF-α(NC+)、空白对照组+TNF-α(CON+),根据文献及本课题组先前的实验结果,TNF-α组均予终浓度为20 ng/ml的NF-κB活化激活剂TNF-α进行干预。应用实时荧光定量-PCR及Western Blot技术检测非TNF-α组NIBP mRNA及蛋白的表达情况以及各组细胞中E-cadherin与N-cadherin的表达；采用倒置相差显微镜观察各组细胞形态的变化。结果 倒置荧光显微镜下可见NIBP-RNAi组及NC组有大量的绿色荧光蛋白。实时荧光定量-PCR及Western Blot均显示NIBP-RNAi组NIBP的表达均显著低于NC组及CON组(P0.05)。实时荧光定量-PCR结果显示,各组E-cadherin mRNA的相对表达量为：NIBP-RNAi组(8.12±0.50)和NIBP-RNAi+组(4.11±1.65)均高于CON组(1.00±0.00)和NC组(1.04±0.05)(P0.05),而CON+组(0.30±0.13)和NC+组(0.32±0.10)则明显低于CON组和NC组(P0.05)；各组N-cadherin mRNA的相对表达量为：NIBP-RNAi组(0.18±0.08)和NIBP-RNAi+组(0.48±0.18)均低于CON组(1.00±0.00)和NC组(0.94±0.03)(P0.05),CON+组(6.55±2.31)和NC+组(7.26±2.20)均高于CON组和NC组(P0.05)。 Western Blot结果显示,各组的E-cadherin的蛋白表达量分别是：NIBP-RNAi组(1.30±0.11)和NIBP-RNAi+组(0.64±0.01)高于CON组(0.37±0.01)和NC组(0.34±0.02)(P0.05),CON+组(0.18±0.02)和NC+组(0.18±0.01)均低于CON组和NC组(P0.05);各组的N-cadherin的蛋白表达量为：NIBP-RNAi组(0.18±0.06)和NIBP-RNAi+组(0.34±0.01)均低于CON组(0.56±0.05)和NC组(0.47±0.13)(P0.05),而CON+组(0.67±0.06)和NC+组(0.68±0.03)均高于CON组和NC组(P0.05)。综上可知,与CON组比较,CON+组、NC+组细胞的E-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显降低、N-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显上升(P0.05), NIBP-RNAi组及IBP-RNAi+组细胞的E-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显上升、N-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显降低,差异有统计学意义(P0.05)；而CON组和NC组比较,以及CON+组和NC+组比较,E-cadherin、N-cadherin的mRNA和蛋白的表达差异均无统计意义(P0.05)。经倒置相差显微镜可观察到CON+组、NC+组的细胞较CON组和NC组的细胞而言明显发生EMT变化,表现为细胞细长的丝状伪足增多,细胞间排列更疏松；NIBP-RNAi组的细胞则由间质细胞形态转变为上皮细胞形态,可见较多的多角形或圆形细胞,伪足明显减少,细胞连接紧密。结论靶向下调NIBP基因的表达可抑制人结肠癌HCT116细胞EMT的发生,这可能与NF-κB经典途径的激活受抑制有关。
【关键词】：结肠 核转录因子-κB诱导激酶和IκB激酶连接蛋白 肿瘤坏死因子-α 上皮-间质转化 慢病毒
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 个人简历3-5
• 中英文缩略词对照表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 实验技术路线图15-16
• 材料与方法16-38
• 结果38-47
• 讨论47-54
• 结论54-55
• 参考文献55-64
• 综述64-78
• 参考文献71-78
• 致谢78-80
• 攻读学位期间以第一作者参与发表的学术论文80

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 周建平,刘祺;生长激素对人结肠癌细胞作用的研究[J];中国普外基础与临床杂志;2005年04期

2 马杉姗;王世平;连正兴;韩红兵;刘慧;;藏灵菇嗜热链球菌胞外多糖对人结肠癌细胞的增殖抑制[J];食品科学;2008年04期

3 宫金伶;黄川;宋德志;姜艳华;赖振屏;高灵茜;王立芳;刘金颖;潘文宝胜;樊晓晖;;新城疫病毒7793株对人结肠癌细胞的杀伤作用[J];现代肿瘤医学;2011年03期

4 徐秋玲;金秀东;郭冉;张绪东;刘桂莲;;五味子乙素逆转人结肠癌细胞多药耐药性[J];中国食物与营养;2011年12期

5 曲娴;陈杰;;表皮生长因子受体反义寡聚核苷酸抑制人结肠癌细胞的增殖[J];世界华人消化杂志;2006年35期

6 彭秋平;梁后杰;周琪;周进明;傅晓岚;钟大平;;己糖激酶-Ⅱ基因在人结肠癌细胞中的表达及其治疗意义[J];中华医学杂志;2007年15期

7 韩晓红;邵世和;许化溪;薛延军;刘嫣芳;邓一脉;陈卫伟;曹娟;;亚硒酸钠对人结肠癌细胞的抑制机制[J];江苏大学学报(医学版);2008年06期

8 刘民培,田庆生,郭玉书,马世英,董宝印,苄非非,王笑利;分泌抗人结肠癌细胞单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立[J];细胞与分子免疫学杂志;1985年02期

9 李建人,赵彼得,罗沈如,马爱敏;高热合并化疗放疗对人结肠癌细胞的作用[J];中华理疗杂志;1995年03期

10 杜培革,董俊红,王振明,安丽萍,傅桂莲;反义人端粒酶催化亚单位基因转染对人结肠癌细胞恶性表型的逆转作用[J];北华大学学报(自然科学版);2005年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 伍焕杰;黄海涛;李倩;张敏;刘莉;梅其炳;;改构苹果多糖对人结肠癌细胞侵袭能力的影响[A];中国药理学会第十次全国学术会议专刊[C];2009年

2 冯海凉;杨丽娟;卞晓翠;杨振丽;顾蓓;张宏;王春景;苏小玲;赵晓梅;刘玉琴;;CD133在人结肠癌细胞分化中的作用[A];中华医学会病理学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年

3 吴嫣爽;王嘉悦;周晓囡;李君;雷蕾;;人结肠癌细胞来源的诱导多能癌(iPC)细胞的建立[A];中国解剖学会2013年年会论文文摘汇编[C];2013年

4 杨毅;刘洪隐;毛慧生;王立梅;;应用C-myc反义RNA转录体对人结肠癌细胞恶性表型的逆转研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

5 邓景岳;杨美华;毕明刚;;新化合物JR6对人结肠癌细胞HT-29体外抑瘤机制研究[A];中国药理学会第十次全国学术会议专刊[C];2009年

6 陆嵘;房静远;王霞;孙丹凤;李恩灵;朱红音;;RNAi阻断人结肠癌细胞ERK-MAPK信号传导通路调控细胞周期的研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

7 金海峰;吕宾;陈U，

本文编号：987804