肝癌细胞HepG2株线粒体LETM1基因突变研究

发布时间：2017-10-07 23:22

  本文关键词：肝癌细胞HepG2株线粒体LETM1基因突变研究

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【摘要】：目的：构建LETM1基因真核表达载体,并检测肝癌HepG2细胞株的LETM1基因突变,探讨线粒体LETM1基因在肝癌发生中的意义。方法：从HepG2株细胞中提取mRNA及合成cDNA,设计并合成LETM1基因引物。用PCR方法扩增LETM1基因,连接到真核表达载体pCMV-3Tag-6、 pCMV-3Myc-2A上,构建重组质粒pCMV-3Tag-LETM1和pCMV-3Myc-LETM1。将质粒进行HindⅢ/Xho Ⅰ双酶切、测序和检测突变位点。结果：成功构建了重组质粒pCMV-3Tag-LETM1和pCMV-3Myc-LETM1;测序LETM1基因序列长度为5462bp；肝癌HepG2细胞株的LETM1基因突变发生于G148A(缬氨酸→异亮氨酸)、G320A(甘氨酸→天冬酰胺)、G344A(精氨酸→组氨酸)、A1760G(赖氨酸→精氨酸)和A1825G(苏氨酸→丙氨酸)。结论：1.LETM1基因突变最常发生于G148A(缬氨酸→异亮氨酸)和A1760G(赖氨酸叶精氨酸)；其次为G344A(精氨酸→组氨酸)。G320A(甘氨酸→天冬酰胺)和A1825G(苏氨酸→丙氨酸)亦发生突变。2.线粒体LETM1基因的突变可能与肝癌的发生有一定的关系。
【关键词】：LETM1 线粒体 基因 HepG2细胞
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-8
• 英文缩略词表8-10
• 第一章 前言10-12
• 第二章 材料与方法12-21
• 2.1 实验仪器、试剂和材料12-13
• 2.1.1 实验材料12
• 2.1.2 主要实验器材12
• 2.1.3 主要实验器材12-13
• 2.1.4 引物的设计13
• 2.1.5 常用试剂的配制13
• 2.2 实验方法13-21
• 2.2.1 HepG2细胞复苏与培养14
• 2.2.2 mRNA提取及cDNA合成14
• 2.2.3 扩增LETM1基因14-15
• 2.2.4 基因的克隆15-17
• 2.2.5 基因序列测序17-21
• 第三章 结果21-24
• 3.1 PCR扩增目的基因21
• 3.2 重组质粒的构建21-22
• 3.3 基因突变检测22-24
• 第四章 讨论24-27
• 第五章 结论27-28
• 参考文献28-31
• 致谢31-32
• 综述32-43
• 参考文献41-43

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 李玮;白云;李云婷;许素菊;;甲胎蛋白的临床应用及实验室评价[J];临床误诊误治;2007年08期

2 郭韬;魏强;;线粒体DNA突变与肿瘤发生的关系[J];生物学通报;2009年11期

3 张U，

本文编号：990672