IL-37抑制小鼠Lewis肺癌细胞增殖的实验研究

发布时间：2017-10-08 02:17

  本文关键词：IL-37抑制小鼠Lewis肺癌细胞增殖的实验研究

  更多相关文章： IL-37 T细胞免疫 Lewis肺癌 重组腺病毒

【摘要】：背景:近年来,肺癌的发病率和死亡率在所有肿瘤中增长是最快的,它已经成为威胁人类健康和生命的最常见的恶性肿瘤之一[1]。肺癌发病是由多种因素共同作用形成的,其病因至今尚不完全明确。大量研究资料表明:吸烟、职业和环境接触、既往肺部慢性感染及遗传等因素是肺癌发生的高危因素[1]。2000年,Kumar等[2]首次发现了IL-37。IL-37是白细胞介素(interleukin,IL)-1家族的第7个成员,即前体肽IL-1F7,又称IL-1H4。绝大多数经典IL-1家族成员的受体、信号传导和功能已经得到了广泛而深入的研究[2]。然而,对于IL-37,人们仍然知之甚少。最近研究显示,IL-37在原发性肝癌中有较强的抑癌作用[3]。但目前IL-37对肺癌的抑癌作用还不清楚。因此,我们提出假说,IL-37对肺癌细胞增殖可能有抑制作用,我们的研究就是围绕这一假说进行开展。本研究通过检测外源性IL-37对CD4+T细胞和CD8+T细胞活化增殖的影响,探讨其对T细胞免疫应答的作用,并通过应用重组人IL-37腺病毒(以下简称为Adv-IL-37)转染肺腺癌细胞系Lewis lung cell(以下简称为LLC),分别观测其对于C57BL/6小鼠和裸鼠肺癌模型中肺癌发病的病理进程的影响,探讨其影响的可能作用机制。目的:研究外源性IL-37对肺癌细胞增殖的抑制作用并探讨其可能作用机制,为肺癌的临床治疗提供新的研究靶点。方法:通过Adv-IL-37转染LLC细胞后,Elisa和Western检测转染Adv-IL-37转染后的LLC细胞IL-37的表达情况。流式细胞仪分析转染IL-37后LLC细胞的增殖能力、细胞周期及凋亡情况。建立C57BL/6小鼠LLC肺肿瘤模型,通过测量小鼠LLC肺癌的肿瘤体积及体重,评价IL-37对小鼠Lewis肺癌的冶疗效果。体外实验研究外源性IL-37对CD4+T细胞和CD8+T细胞活化及增殖的影响。建立裸鼠LLC肺肿瘤模型,体内验证IL-37对CD4+T细胞和CD8+T细胞活化及增殖影响,并评价其在小鼠体内抑瘤作用。通过对比C57BL/6小鼠与裸鼠结果差异性,从而进一步验证外源性IL-37对CD4+T细胞和CD8+T细胞增殖活化的影响。结果:Adv-IL-37腺病毒能成功转染LLC细胞。通过Elisa及Western结果显示IL-37能够在转染了Adv-IL-37的LLC细胞中高效且稳定的表达。Adv-IL-37转染对LLC细胞的体外增殖能力无明显影响。Adv-IL-37转染对LLC细胞的细胞周期及细胞凋亡无明显影响。在C57BL/6小鼠LLC肺肿瘤治疗模型中证实IL-37对LLC肺癌的发生发展有抑制作用。体外实验证实IL-37对CD4+T细胞和CD8+T细胞活化及增殖有促进作用。在裸鼠LLC肺肿瘤治疗模型中证实IL-37对LLC肺癌的发生发展未见明显抑制作用。通过分析C57BL/6小鼠与裸鼠IL-37抑瘤效果的差异性,进一步验证了IL-37通过促进CD4+T细胞和CD8+T细胞活化、增殖来抑制肿瘤生长,从而达到抑制肿瘤生长的作用。结论:Adv-IL-37转染对LLC细胞的体外增殖能力无明显影响。Adv-IL-37转染对LLC细胞的细胞周期及细胞凋亡无明显影响。IL-37对LLC所致正常小鼠Lewis肺癌有抑制作用,但对其所致缺少T细胞的裸鼠的Lewis肺癌生长无抑制作用。IL-37通过激活T细胞触发肿瘤免疫,发挥抗肿瘤的作用。
【关键词】：IL-37 T细胞免疫 Lewis肺癌 重组腺病毒
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-11
• 第2章 材料与方法11-24
• 2.1 材料11-15
• 2.1.1 主要仪器11-12
• 2.1.2 主要试剂购买12-13
• 2.1.3 主要试剂的配制13-15
• 2.2 方法15-23
• 2.2.1 IL-37腺病毒载体的构建15
• 2.2.2 LLC 肿瘤细胞培养(LLC 细胞系由上海细胞库提供)15-16
• 2.2.3 细胞转染16-17
• 2.2.4 检测IL-37在LLC细胞中的表达情况17-20
• 2.2.5 CCK8检测病毒转染后LLC细胞的增殖能力变化20
• 2.2.6 检测病毒转染后LLC细胞周期的变化20-21
• 2.2.7 检测病毒转染后LLC细胞凋亡的变化21
• 2.2.8 小鼠T细胞的分离、纯化与培养21-22
• 2.2.9 IL-37刺激T淋巴细胞增殖及活化22-23
• 2.2.10 建立实验动物肺癌治疗模型23
• 2.3 数据处理和统计学分析23-24
• 第3章 结果24-29
• 3.1 培养中的LLC细胞形态24
• 3.2 腺病毒转染LLC细胞的转染效率24-25
• 3.3 转染后LLC细胞IL-37基因表达情况25
• 3.4 病毒转染对LLC细胞的增殖及周期的影响25-26
• 3.5 病毒转染对各组LLC细胞凋亡的影响26-27
• 3.6 在C57BL/6 小鼠与裸鼠Lewis肺癌模型中IL-37抑癌作用27-28
• 3.7 IL-37刺激T淋巴细胞的活化及增殖28-29
• 第4章 讨论29-31
• 第5章 结论与展望31-32
• 5.1 结论31
• 5.2 不足之处和展望31-32
• 致谢32-33
• 参考文献33-36
• 综述36-43
• 参考文献41-43

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本文编号：991420