PLCE1在食管鳞癌组织中的表达及其对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响研究

发布时间：2017-10-08 03:33

  本文关键词：PLCE1在食管鳞癌组织中的表达及其对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响研究

  更多相关文章： 食管鳞癌 PLCE1 免疫组化 RNA干扰 增殖 侵袭

【摘要】：目的:探讨PLCE1在食管鳞癌、癌旁正常组织中的表达及临床意义;下调PLCE1基因对食管鳞癌细胞增殖和侵袭调控的影响。方法:收集100例汉族食管鳞癌组织及与其对应的99例癌旁正常组织,应用免疫组化Envision法检测PLCE1蛋白表达,并分析其与食管鳞癌临床病理参数及与食管鳞癌患者预后的关系;用PLCE1特异性的si RNA转染食管鳞癌细胞系Eca109、EC9706,应用q RT-PCR、Westem blot及免疫荧光检测si RNA对食管鳞癌细胞PLCE1的干扰效率;转染48小时后,MTT法和单克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力;Westem blot检测与凋亡相关蛋白及上皮间叶转化相关标记物的蛋白表达情况。结果:(1)PLCE1蛋白在食管鳞癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,并且发现PLCE1高表达与临床TNM分期及淋巴结的转移有关,且PLCE1高表达组比低表达组预后差。(2)选择转染效率高的2条PLCE1-si RNA混合后转染食管鳞癌细胞,q RT-PCR、Westem blot及免疫荧光显示,将这两条si RNA混合后转染食管鳞癌细胞均能抑制PLCE1 m RNA和蛋白的表达量,转染PLCE1-si RNA48小时后,MTT实验结果显示转染的食管鳞癌细胞株与对照组相比,实验组细胞的增殖受到明显抑制,单克隆形成实验显示实验组的细胞团数明显减少,流式细胞术实验显示经过PLCE1-si RNA转染的食管鳞癌细胞株与对照组相比,早期和晚期凋亡的比率明显升高,利用Westem blot进一步检测凋亡相关分子Bax,BCL-2和cleaved-PARP的蛋白表达情况,结果显示沉默了PLCE1基因的食管鳞癌细胞株中促凋亡蛋白Bax和凋亡标记物cleaved-PARP的蛋白表达量明显增高,而抗凋亡蛋白BCL-2蛋白的表达量明显降低。Transwell实验显示,与对照组相比,转染PLCE1-si RNA的食管鳞癌细胞株的侵袭能力明显降低;Westem blot检测上皮间叶相关标记物,结果发现,PLCE1基因被干扰后,其上皮的标记物E-cadherin明显升高,而间叶的标记物Vimentin则明显下降。结论:(1)PLCE1蛋白在食管鳞癌组织中的表达高于癌旁正常组织,PLCE1蛋白的高表达与食管鳞癌的淋巴结转移和TNM分期有关,且其高表达与食管鳞癌患者预后差密切相关。(2)下调PLCE1基因可抑制食管鳞癌细胞的增殖,促进食管鳞癌细胞的凋亡,提示PLCE1可能参与食管鳞癌细胞的增殖调控;下调PLCE1基因可显著抑制食管鳞癌细胞的侵袭,并且可能通过调控上皮间叶转化来调控食管鳞癌细胞的侵袭转移。
【关键词】：食管鳞癌 PLCE1 免疫组化 RNA干扰 增殖 侵袭
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 缩略词一览表8-9
• 前言9-12
• 材料与方法12-25
• 1. 材料12-15
• 1.1 研究对象12-13
• 1.2 主要试剂与耗材13-14
• 1.3 设计合成si RNA14-15
• 2. 方法15-25
• 2.1 临床病理学研容内容和方法15-16
• 2.2 组织芯片制备技术16
• 2.3 免疫组织化学方法16-18
• 2.4 细胞培养18
• 2.5 小干扰RNA转染18-19
• 2.6 实时定量PCR步骤19-20
• 2.7 Western Blot检测20-23
• 2.8 免疫荧光实验23
• 2.9 MTT测细胞生长曲线23
• 2.10 克隆形成实验23
• 2.11 流式细胞仪检测细胞的凋亡23-24
• 2.12 Transwell侵袭实验24
• 2.13 统计方法24-25
• 结果25-34
• 1.食管鳞癌及癌旁正常组织中PLCE1蛋白的表达及与临床病理参数之间的关系25-28
• 2.PLCE1特异性si RNA转染食管鳞癌细胞后PLCE1下调28-29
• 3.干扰PLCE1表达对食管鳞癌细胞增殖和凋亡的影响29-32
• 4.干扰PLCE1表达对食管鳞癌细胞侵袭的影响32-34
• 讨论34-38
• 结论38-39
• 参考文献39-44
• 文献综述44-52
• 参考文献49-52
• 致谢52-53
• 作者简介53-54
• 附件54

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 钮小玲;黄文彦;;PLCE1基因突变与激素耐药性肾病综合征的关系[J];国际病理科学与临床杂志;2009年04期

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 李肃;PLCE1在食管鳞癌组织中的表达及其对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响研究[D];石河子大学;2015年

2 吴磊;PLCE1在胃癌中的表达及其意义[D];华中科技大学;2011年

，

本文编号：991782