中药治疗糖尿病活性筛选及Ⅱ型糖尿病大鼠粪便代谢组学的研究

发布时间：2017-10-11 17:16

  本文关键词：中药治疗糖尿病活性筛选及Ⅱ型糖尿病大鼠粪便代谢组学的研究

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【摘要】：糖尿病是一种由胰岛素绝对或相对缺乏而引起的以高血糖为特征的慢性代谢性疾病,机体长期的高血糖环境会导致眼、肾脏、心脏等众多组织器官的病变,统称糖尿病并发症,糖尿病及其并发症的发病机制和治疗机制复杂而多样。治疗糖尿病的中药多达两百多种,其治疗具有“多组分”“多途径”等特点,各中药治疗机制尚不完全明确。本文从蛋白非酶糖基化抑制活性、脂质过氧化抑制活性、α-葡萄糖苷酶抑制活性三个角度,对黄芩、栀子等20余种中药的治疗机制及治疗效果进行考察。通过体外实验筛选出金银花等8种具有较强蛋白非酶糖基化抑制活性的中药,丁香等9种抗脂质过氧化活性较强的中药以及山茱萸等9种对α-葡萄糖苷酶具有较好抑制作用的中药。并通过成分分析,发现富含黄酮类和酚类成分中药多具有非酶糖基化和脂质过氧化抑制活性,而具有α-葡萄糖苷酶抑制活性中药的有效成分则各不相同。依据相关文献,对栀子苷、栀子环烯醚萜、栀子黄芩提取物治疗Ⅱ型糖尿病进行粪便代谢组学考察。通过脂肪乳灌胃和链脲佐菌素诱导建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型,分组后连续灌胃给药12周治疗,定期收集粪便样品。利用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱技术,对空白对照组、模型对照组和各给药组粪便样品进行检测。对质谱数据以Mass Lynx V4.1和Marker Lynx Application Manager进行峰处理,并使用EZinfo 2.0软件中的PCA和OPLS-DA对数据矩阵进行多元变量分析,使用PASW Statistics 18.0软进行t检验,通过变量重要性因子(VIP)比较组间差异,并通过检索HMDB(Human Metabolome Database)等生物学数据库查找潜在生物标记物,根据二级串联质谱信息对潜在标记物进行鉴定。通过分析标记物所体现的代谢通路的变化,从而阐明糖尿病使机体产生的代谢变化以及各治疗药物的作用机制。研究结果表明,栀子苷、栀子环烯醚萜、栀子黄芩提取物对Ⅱ型糖尿病大鼠均具有一定的治疗作用。通过分析和鉴定发现了36种潜在的生物标记物,通过生物标记物可以看出Ⅱ糖尿病引起机体内氨基酸代谢通路、脂肪酸合成通路、鞘脂类代谢通路,胆汁酸及其他物质的代谢的变化。栀子苷、栀子环烯醚萜、栀子黄芩提取物对氨基酸代谢通路、鞘脂类代谢通路及胆汁酸含量的变化具有不同程度的调节作用。而对脂肪酸合成通路不具有调节作用。
【关键词】：糖尿病 中药 活性筛选 代谢组学 液质联用 生物标记物
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R259
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-12
• 第一章 绪论12-21
• 1.1 糖尿病概述12-18
• 1.1.1 糖尿病简介12
• 1.1.2 糖尿病并发症12-13
• 1.1.3 糖尿病治疗机制及代表药物13-15
• 1.1.4 治疗糖尿病的中药15-18
• 1.2 代谢组学简介18-19
• 1.3 立题依据与研究思路19-21
• 第二章 中药蛋白非酶糖基化抑制活性的筛选21-27
• 2.1 实验部分21-23
• 2.1.1 试剂与仪器21-22
• 2.1.2 溶液的配制22
• 2.1.3 中药提取液的制备22
• 2.1.4 蛋白非酶糖基化反应体系的建立22-23
• 2.1.5 中药抑制活性的测定及计算方法23
• 2.2 结果与讨论23-25
• 2.3 小结25-27
• 第三章 中药脂质过氧化抑制活性的筛选27-32
• 3.1 实验部分27-29
• 3.1.1 试剂与仪器27-28
• 3.1.2 溶液的配制28
• 3.1.3 中药提取液的制备28
• 3.1.4 组织上清液的制备28
• 3.1.5 中药脂质过氧化抑制活性评价方法28-29
• 3.2 结果与讨论29-31
• 3.3 小结31-32
• 第四章 中药抑制 ɑ-葡糖糖苷酶活性的筛选32-38
• 4.1 体外活性筛选32-34
• 4.1.1 试剂与仪器32-33
• 4.1.2 溶液的配制33
• 4.1.3 中药提取液的制备33
• 4.1.4 中药抑制ɑ-葡糖糖苷酶活性评价方法33-34
• 4.2 体外活性筛选结果与讨论34-35
• 4.3 四氧嘧啶糖尿病小鼠实验35-36
• 4.4 四氧嘧啶糖尿病小鼠实验结果与讨论36-37
• 4.5 小结37-38
• 第五章 Ⅱ型糖尿病大鼠粪便代谢组学的研究38-51
• 5.1 实验部分38-40
• 5.1.1 试剂与仪器38
• 5.1.2 糖尿病大鼠模型的建立38-39
• 5.1.3 生物样品的收集和处理39
• 5.1.4 色谱质谱条件39-40
• 5.1.5 数据处理40
• 5.2 结果与讨论40-50
• 5.2.1 总离子流图40-42
• 5.2.2 PCA分析42-43
• 5.2.3 OPLS-DA分析及生物标记物的鉴定43-48
• 5.2.4 氯仿提取法处理样品的结果分析48-50
• 5.3 小结50-51
• 第六章 栀子黄芩活性成分治疗Ⅱ型糖尿病大鼠的粪便代谢组学的研究51-62
• 6.1 实验部分51-54
• 6.1.1 试剂与仪器51
• 6.1.2 药材的提取51-52
• 6.1.3 实验分组及给药方案52-53
• 6.1.4 生物样品的收集和处理53
• 6.1.5 色谱质谱条件53
• 6.1.6 数据处理53-54
• 6.2 结果与讨论54-61
• 6.2.1 总离子流图54-57
• 6.2.2 PCA分析57-59
• 6.2.3 生物标记物含量变化分析59-61
• 6.3 小结61-62
• 参考文献62-68
• 致谢68

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本文编号：1013745