基于“痰”致病理论研究橙皮苷对动脉粥样硬化相关蛋白聚糖的作用

发布时间：2017-10-25 01:06

  本文关键词：基于“痰”致病理论研究橙皮苷对动脉粥样硬化相关蛋白聚糖的作用

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【摘要】：目的：动脉粥样硬化(AS)是常见心血管疾病的一种,目前已经是危险人类健康的重大疾病之一。在AS的发生发展过程中,血管平滑肌细胞的增殖和迁移在其中起到重要作用,同时过程中伴随着一系列的炎症反应。现代研究表明As病变中的脂质沉积是继发于动脉基质的改变之后,细胞外基质中蛋白聚糖的堆积导致了脂质沉积,进而引起AS病变的形成。中医中“痰”理论认为蛋白聚糖病变与“痰”有密切关系,化痰方药在治疗AS中有良好的疗效。本研究采用氧化型低密度脂蛋白诱导小鼠血管平滑肌细胞建立AS细胞模型,探讨橙皮苷对AS模型血管平滑肌细胞动脉粥样硬化相关蛋白聚糖表达与脂质代谢的影响。方法：实验采用MTT法测定不同浓度氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞增殖的影响,筛选造模浓度；测定不同浓度橙皮苷对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响；通过DMMB法检测橙皮苷对血管平滑肌细胞生成糖胺聚糖的影响；采用Western Blotting法检测橙皮苷对血管平滑肌细胞biglycan和decorin蛋白表达的影响；通过油红0染色法检测橙皮苷对血管平滑肌细胞脂质代谢的影响；Transwell小室迁移实验检测橙皮苷对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响。结果：1氧化型低密度脂蛋白可以诱导血管平滑肌细胞增殖,50μg/mL的ox-LDL可以诱导AS平滑肌细胞模型成立。与空白对照组比较,在25μg/mL——50μg/mL范围内,血管平滑肌细胞的增殖能力明显上升(P0.01),说明在这个浓度范围内的ox-LDL对血管平滑肌细胞的增殖有明显的促进作用。其中,ox-LDL50μg/mL组的促进作用明显强于ox-LDL25μg/mL组,说明在25μg/mL——50μg/mL范围内,ox-LDL对血管平滑肌细胞的增殖能力有浓度依赖关系。但当ox-LDL浓度在75μg/mL——125μg/mL范围内却表现出抑制血管平滑肌的作用,而且抑制作用较强。说明ox-LDL在较低浓度时对血管平滑肌细胞的增殖表现为促进作用,当浓度升高是反而会发挥抑制血管平滑肌细胞增殖的作用。2橙皮苷在200——250 μ g/mL浓度范围内对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞的增殖有抑制作用,且浓度越高,抑制作用越明显。与空白对照组比较,橙皮苷在50——150 μ g/mL范围内对平滑肌细胞的增殖无明显作用。说明在此浓度范围内,橙皮苷对血管平滑肌细胞的生长无抑制或促进作用,对其生长无毒性作用。但随着橙皮苷浓度达到200 μ g/mL及以上时,橙皮苷对低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞的增殖表现出明显的抑制作用。3橙皮苷对血管平滑肌细胞糖胺聚糖表达的影响。结果显示,与空白对照组比较,ox-LDL组中上清液与细胞层中GAG含量明显升高(P0.01)。与ox-LDL组比较,加入浓度梯度橙皮苷各组上清液与细胞层中GAG含量都有明显降低(P＜0.01),且有浓度依赖性。与空白对照组比较,ox-LDL组上清液中GAG在总GAG中的比例明显上升,说明ox-LDL可明显促进小鼠血管平滑肌细胞GAG的表达及代谢。与ox-LD1。组比较,50μg/mL橙皮苷组作用不明显,差异无统计学意义。但100μg/mL橙皮苷组、150μg/mL橙皮苷组均可降低由ox-LDL诱导的小鼠血管平滑肌细胞GAG的表达及代谢。但100μg/mL橙皮苷组与150μg/mL橙皮苷组作用强度无显著差异。4橙皮苷对平滑肌细胞硫酸软骨素蛋白聚糖biglycan和decorin表达的影响。结果显示,与空白对照组比较,ox-LDL组biglycan的表达量明显升高(P0.01),decorin的表达显著下降；与ox-LDL组比较,50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL橙皮苷组biglycan的表达量均有所下降(P0.01), decorin的表达量有所上升(P0.05)。5橙皮苷对血管平滑肌细胞脂质代谢的影响。结果显示,与空白对照组比较,ox-LDL组细胞内脂质明显增加；与ox-LDL组比较,橙皮苷50μg/mL组细胞内脂质含量无明显差异,橙皮苷100μg/mL组细胞内脂质明显下降,橙皮苷150μg/mL组细胞内脂质也显著降低。6橙皮苷对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞迁移的抑制作用。与空白对照组比较,ox-LDL能够明显促进血管平滑肌细胞的迁移(P0.01),证实了50 μg/mox-LDL可以诱导平滑肌细胞的迁移,细胞模型成立。加入橙皮苷进行干预,结果发现,与ox-LDL组相比,各个浓度橙皮苷组均可明显抑制血管平滑肌细胞的迁移(P0.01),差异有统计学意义。而且,与橙皮苷50 μ g/mL组比较,橙皮苷100μg/mL组和橙皮苷200 μ g/mL组的抑制做用要强。说明橙皮苷对血管平滑肌细胞的迁移抑制作用可能存在浓度依赖性。但与橙皮苷100 μ g/mL组比较,橙皮苷200μg/mL组抑制作用并不明显(P0.05),无统计学意义。可能说明,橙皮苷对血管平滑肌细胞迁移的抑制作用浓度范围在50μg/mL——200μg/mL,并在100 μ g/mL时达到较大程度,在100μg/mL——200μg/mL变化不明显。结论:橙皮苷通过降低糖胺聚糖代谢、抑制biglycan表达、促进decorin表达等方面调节脂质代谢,同时可通过抑制平滑肌细胞增殖和迁移,发挥抗动脉粥样硬化的作用。
【关键词】：橙皮苷 “痰” 动脉粥样硬化 血管平滑肌细胞 蛋白聚糖 脂质
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R259
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 引言11-12
• 第一章 文献研究12-21
• 第一节 中医对痰的认识及现代研究12-14
• 一、痰的概念12
• 二、痰的来源12
• 三、痰的病因病机12-13
• 四、痰的实质13-14
• 第二节 痰与AS关系研究14-15
• 一、中医对AS的认识14
• 二、病因及病机14-15
• 三、治则治法15
• 第三节 西医对动脉粥样硬化的认识与研究15-17
• 一、动脉粥样硬化15
• 二、血管平滑肌细胞与动脉粥样硬化15-16
• 三、ox-LDL与AS16
• 四、炎症与AS16-17
• 第四节 动脉壁硫酸软骨素蛋白聚糖与AS的关系17-19
• 一、蛋白聚糖与糖胺多糖17-18
• 二、动脉壁硫酸软骨素蛋白聚糖在AS中的作用18
• 三、硫酸软骨素蛋白聚糖biglycan和decorin在AS中的作用18-19
• 第五节 橙皮苷现代药理研究进展概述19-21
• 一、抗氧化作用19
• 二、对心血管疾病的作用19-20
• 三、抗肿瘤作用20
• 四、其他作用20-21
• 第二章 实验部分21-40
• 第一节 AS平滑肌细胞模型的建立21-25
• 一、实验材料21-22
• 二、实验方法22-23
• 三、实验结果23-24
• 四、讨论24-25
• 第二节 橙皮苷对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响25-27
• 一、实验材料25
• 二、实验方法25-26
• 三、实验结果26-27
• 四、讨论27
• 第三节 橙皮苷对血管平滑肌细胞糖胺聚糖表达的影响27-30
• 一、实验材料27-28
• 二、实验方法28
• 三、实验结果28-29
• 四、讨论29-30
• 第四节 橙皮苷对平滑肌细胞硫酸软骨素蛋白聚糖biglycan和decorin表达的影响30-35
• 一、实验材料30-31
• 二、实验方法31-33
• 三、实验结果33-34
• 四、讨论34-35
• 第五节 橙皮苷对血管平滑肌细胞脂质代谢的影响35-37
• 一、实验材料36
• 二、实验方法36
• 三、实验结果36-37
• 四、讨论37
• 第六节 橙皮苷对血管平滑肌细胞迁移的影响37-40
• 一、实验材料38
• 二、实验方法38
• 三、实验结果38-39
• 四、讨论39-40
• 第三章 结语40-42
• 参考文献42-46
• 附录46-49
• 致谢49-50
• 统计学审核证明50

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本文编号：1091349