桂枝甘草汤指纹图谱及血清药物化学研究

发布时间：2016-09-29 07:21

本文关键词：桂枝甘草汤指纹图谱及血清药物化学研究，由笔耕文化传播整理发布。

《河南中医学院》 2014年

桂枝甘草汤指纹图谱及血清药物化学研究

原双兴

【摘要】：心律失常是指心脏冲动的频率、节律、起源部位、传导速度或激动次序的异常。其为临床常见的心血管疾病或并发症，，临床表现轻重不一。致命性心律失常是导致猝死的主要原因，严重危害患者的身体健康。目前治疗心律失常仍以药物治疗为主，但临床治疗心律失常的药物同时也有不同程度的致心律失常的作用。研究能够多靶点干预、恢复离子通道正常生理功能的药物是今后药物研发的方向。桂枝甘草汤出自《伤寒论》，是治疗心悸的基础方，桂枝甘草汤具有很好的抗心律失常作用，但是其抗心律失常机制尚不清楚。本实验运用现代分离方法提取复方的有效部分，从宏观上反映中药物质群的指纹图谱法，明确桂枝与炙甘草组方配伍前后及含药血清的中药物质群组分及变化，初步确认桂枝甘草汤中的有效组分，作为该方进一步电生理机制研究的前提。目的:严格质控桂枝和炙甘草单味药材，明确桂枝与炙甘草组方配伍前后及含药血清的中药物质群成分及变化。方法:利用高效液相色谱法（High performance liquid,HPLC）建立灵敏度高、稳定性及准确性良好的方法对桂枝甘草汤水提液成分类别进行研究。用液质联用法（Performance liquid and Mass Spectrometry,LC-MS）明确桂枝水提液、炙甘草水提液、桂枝甘草汤水提液中主要药物组分及变化。用LC-MS明确所采集的血清中主要成分，与相应的各组药物的体外指纹图谱对照比较分析，指认归属来源于各药味的成分峰，确认原形成分及代谢产物，追踪中药及配伍组方的药效成分。结果:①本实验建立了桂枝、炙甘草、桂枝甘草汤的指纹图谱，通过中药指纹图谱相似度评价系统对比得出10批桂枝中有4个共有峰，炙甘草有16个共有峰，桂枝甘草汤中有25个共有峰，通过含量测定得出10批药材共有的成分含量差别较大。②利用桂枝指纹图谱色谱条件的方法对桂枝水提液的稳定性进行考察，发现桂枝中主要成分肉桂酸10h内峰面积的RSD为21.51%,6h内峰面积的RSD为2.77%。③利用桂枝甘草汤指纹图谱色谱条件的方法对桂枝甘草汤水提液的稳定性进行考察，结果12h内肉桂酸峰面积RSD为1.29%，桂皮醛峰面积RSD为2.20%。④利用液质联用技术比较得出桂枝、炙甘草及桂枝甘草汤的主要化学成分分子组成，桂枝鉴定85个准分子离子峰，炙甘草鉴定28个准分子离子峰及桂枝甘草汤鉴定出98个准分子离子峰，并比较桂枝甘草汤处方比例配伍后新产生的化学物质共44个。⑤利用液质联用技术比较体外化学成分分子与体内移行成分分子得出桂枝有8个化学成分分子被吸收入血，炙甘草中有5个化学成分分子被吸收入血，桂枝甘草汤中有12个化学成分分子被吸收入血；桂枝体外成分与血中移行成分只有1个共同成分，桂枝甘草汤煎液体外成分与血中移行成分无共同成分，桂枝血清、桂枝甘草汤血清移行成分中有7个共同成分。结论:①本实验建立了桂枝、炙甘草、桂枝甘草汤的指纹图谱，选择了最优化的色谱条件及检测波长，各组分色谱峰分离度和峰形良好。表明所建方法灵敏度高、稳定性和准确性良好，通过《中药指纹图谱相似度评价系统》2004版对10批桂枝、炙甘草、桂枝甘草汤指纹图谱进行分析，各样品相似度良好，为桂枝、炙甘草、桂枝甘草汤质量标准建立提供了可靠的科学依据。同时发现桂枝、炙甘草、桂枝甘草汤中部分共有峰的含量存在较大差别，表明不同来源的桂枝、炙甘草成分虽然化学成分种类相似度较高，但含量存在较大差异，这些差异可能对药效产生影响，所以在应用桂枝甘草汤时，应严格控制原料饮片的来源和质量。②桂枝中的主要成分桂皮醛在空气中易氧化，稳定性较差，桂枝甘草汤应用时存储时间可能对药效产生影响。③桂枝和炙甘草合煎后，桂皮醛的稳定性明显优于桂枝煎液。④通过液质联用技术得出了桂枝、炙甘草及桂枝甘草汤的主要化学成分，桂枝甘草汤合煎液同单煎液相比，产生了新的化学成分。⑤通过液质联用技术比较得出桂枝单煎液体外成分与血中移行成分比较，发现1个共同成分，可能为药液直接吸收入血的成分。⑥通过液质联用技术比较得出桂枝甘草汤煎液体外成分与血中移行成分未发现共同成分，可能给药1小时后药物各成分已发生代谢。⑦通过液质联用技术比较得出桂枝血清、桂枝甘草汤血清移行成分中发现7个共同成分，可能来源于桂枝入血成分的代谢产物。

【关键词】：
【学位授予单位】：河南中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R284
【目录】：

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