益气养阴通络散结方防治早期糖尿病肾病的临床及实验研究

发布时间：2017-12-31 08:21

  本文关键词：益气养阴通络散结方防治早期糖尿病肾病的临床及实验研究　出处：《北京中医药大学》2016年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：[目的]通过对早期糖尿病肾病气阴两虚,瘀血阻络证患者的临床观察,评价益气养阴通络散结方治疗早期糖尿病肾病的临床疗效和安全性,并进一步通过实验研究探讨益气养阴通络散结方对自发性糖尿病动物模型KKAy小鼠肾脏病理改变的影响和对肾脏RAS系统ACE-AngⅡ-AT1轴和ACE2-Ang(1-7)-Mas轴的调节作用。[方法]临床研究：采用随机对照的方法,将64例早期糖尿病肾病气阴两虚,瘀血阻络证患者随机分为中药组33例和对照组31例,中药组为基础治疗加益气养阴通络散结方口服,对照组为基础治疗加厄贝沙坦片口服,进行为期12周的临床观察。试验过程中记录患者的生命体征、监测血糖,通过观察治疗前后两组患者的24h尿微量白蛋白定量、中医证候积分、血糖(FBS、PBS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血脂(TG、TC、LDL-C、 HDL-C)、血β2微球蛋白(p2-MG)、血尿酸(UA)的变化,进行疗效评价；通过观察两组患者治疗前后的肝肾功能、血常规、尿常规、便常规、心电图及有无不良反应进行安全性评价。实验研究：采用48只10-11周龄雄性自发性糖尿病动物模型KKAy小鼠适应性喂养1周,将2次空腹血糖均大于13.9mmol/L的KKAy小鼠纳入实验,按体重和血糖随机分为模型组和中药组,每组各24只。每组再随机分为3个小组,即4周组、8周组和12周组,每小组8只。C57BL/6J小鼠为正常组,24只,随机分为4周组、8周组和12周组,每小组8只。中药组灌胃益气养阴通络散结方,模型组及正常组予灌胃同体积的蒸馏水,分别给药4、8、12周,实验中记录小鼠一般状况,体重及血糖。分别于治疗后第4、8、12周取材,取血检测小鼠血糖、血脂指标,采用ELISA法检测血清AngⅡ含量；切取小鼠肾组织做病理切片,行HE、Masson、PASM染色,光学显微镜下观察各组小鼠肾脏组织形态学变化,并对其进行半定量评价,并制作ACE、ACE2、AngⅡ免疫组化,Western blot检测ACE.ACE2.MAS的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测AngⅡ mRNA的表达。[结果]临床研究发现：治疗12周后,与对照组比较,益气养阴通络散结方可明显改善患者的中医症状(P0.05),特别是气阴两虚,瘀血阻络主症：神疲乏力、口干舌燥、肢体麻木,有效率分别为87.88%、87.10%、82.14%,并能有效减少患者24小时尿微量白蛋白定量(P0.05)；中药组对HbAlc、TG、LDL-C指标的改善情况均优于对照组(P0.05),中药组的总有效率为84.8%,优于对照组61.2%(P0.05)。在安全性指标评价方面,益气养阴通络散结方组治疗前后,血常规、尿常规加镜检、便常规、肝功能(AST、ALT、ALB)、肾功能(Scr、BUN)均在正常范围,治疗过程中中药组未见不良反应发生。实验研究表明：与正常组相比,模型组和中药组KKAy小鼠体重、空腹血糖(FBS)、血脂(TG、TC、LDL-C)显著升高(P0.05)。与模型组相比,中药组在治疗各阶段血糖、血脂情况均有不同程度的降低,中药组的FBS、TG水平在第12周明显低于模型组(P0.05),中药组的TC、LDL-C水平在第8周明显低于模型组(P0.05)。通过光镜观察到：第8周末模型组小鼠肾小球较正常组肥大,肾小球基底膜增厚,细胞外膜基质增加,部分肾小管上皮细胞肿胀,Masson染色显示蓝染区域增加,提示胶原纤维增多,PASM染色显示基底膜增厚。半定量分析肾组织病理损伤评分升高,至第12周末,肾小球囊腔扩张粘连,肾小球基底膜增宽明显,毛细血管扩张,肾小球中度系膜基质沉积,肾小管扩张,上皮细胞肥大,胞质出现空泡样改变,部分肾小管内可见蛋白管型,Masson的蓝染区域明显扩大,肾间质明显的胶原组织增生,PASM染色显示基底膜颜色明显增厚。而经中药复方干预的中药组,上述指标及肾脏病理改变均较模型组有明显改善(P0.05)。与正常组相比,从实验第4周开始,模型组小鼠血清AngⅡ的表达、肾脏AngⅡ mRNA和蛋白半定量表达、ACE蛋白表达明显升高(P0.05或P0.01), ACE2蛋白在实验第4周时表达升高,但无统计学差异(P0.05),随之表达降低,在8周、12周时明显低于正常组(P0.05或P0.01)；随着周龄的增加,模型组小鼠MAS蛋白表达呈下降趋势,在8周、12周明显低于正常组小鼠(P0.01)。与对照组小鼠相比,中药组小鼠血清Ang Ⅱ、肾脏AngⅡ mRNA和蛋白半定量表达、ACE蛋白表达较同期的模型组小鼠减少,在12周明显低于模型组,有统计学意义(P0.05)；中药组ACE2、 MAS蛋白虽然也随着周龄增加而减少,但表达较同期模型组小鼠的升高,差异在12周时有统计学意义(P0.05)。[结论]1、益气养阴通络散结方可缓解早期糖尿病肾病患者的临床症状、改善糖脂代谢、减少24小时尿微量白蛋白定量,未出现不良反应,表明益气养阴通络散结方对早期糖尿病肾病气阴两虚,瘀血阻络患者有较好的疗效和安全性。2、益气养阴通络散结方可改善自发性糖尿病动物模型KKAy小鼠的糖脂代谢紊乱、减轻糖尿病肾病的肾脏病理学改变,表明益气养阴通络散结方对糖尿病模型动物的肾脏具有一定的保护作用。其作用机制可能与下调KKAy小鼠血清AngⅡ含量、肾脏ACE蛋白及肾脏AngⅡ mRNA和蛋白表达、上调肾脏ACE2和MAS蛋白的表达,以调节肾脏局部RAS系统中ACE-AngⅡ-AT1轴和ACE2-Ang(1-7)-MAS轴的失衡有关。
[Abstract]:[Objective] Based on early diabetic nephropathy with deficiency of Qi and Yin, clinical observation of patients with blood stasis syndrome, the clinical efficacy and safety evaluation of Yiqi Yangyin Tongluo Sanjie Decoction in the treatment of early diabetic nephropathy, and further study of Yiqi Yangyin Tongluo Sanjie Decoction on the spontaneous changes of animal models of diabetes mellitus and renal pathology of KKAy mice kidney RAS system ACE-Ang II -AT1 axis and ACE2-Ang (1-7) -Mas axis regulation. Method: clinical study: a randomized control method, 64 cases of early diabetic nephropathy with Qi and yin deficiency, blood stasis syndrome were randomly divided into treatment group of 33 cases and 31 cases in the control group, Chinese medicine group based therapy plus Yiqi Yangyin Tongluo Sanjie decoction, control group based treatment of irbesartan tablets, clinical observation for 12 weeks. The patient's vital signs during the test record, monitoring of blood sugar through 瑙傚療娌荤枟鍓嶅悗涓ょ粍鎮ｈ，

本文编号：1358959