桑柏生发方在毛发再生过程中对VEGF等细胞因子的影响

发布时间：2017-12-31 20:29

本文关键词：桑柏生发方在毛发再生过程中对VEGF等细胞因子的影响　出处：《南京中医药大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：以名老中医验方桑柏生发方为研究对象,观察桑柏生发方不同提取液对毛发再生过程中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、白细胞介素1β(interleukin-1 beta, IL-1β)以及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)的影响,以期探索其生发的作用机制,为方剂的临床应用提供理论基础和实验依据。方法：临床收集毛发移植手术患者枕部头皮完整毛囊进行毛乳头细胞的分离和培养,取4-6代人毛乳头细胞转孔板培养,分为四组：桑柏生发方水提液干预组,桑柏生发方醇提液干预组,阳性对照组药物选用2%米诺地尔,空白对照组不加药刺激；以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定体外培养的人毛乳头细胞的增殖活性；酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测细胞上清液VEGF、IL-1β和 TNF-α三种细胞因子的含量；反转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测细胞VEGF、IL-1β和 TNF-α mRNA表达；PI染色流式检测毛乳头细胞周期分布的变化；Annexin/PI染色流式检测细胞分组间凋亡水平的变化；免疫荧光流式细胞术检测人毛乳头细胞IL-1 β受体、TNF-α受体及VEGF受体表达水平。结果：建立完善的体外培养毛乳头细胞技术体系,通过MTT检测结果得到桑柏生发方水提液和醇提液刺激人毛乳头细胞增殖的最佳浓度分别为0.7g/1和1g/l。 ELISA实验结果显示：与空白对照组相比,桑柏生发方水提液组和桑柏生发方醇提液组均能促进人毛乳头细胞分泌VEGF (P0.05, P0.01);与阳性对照组相比,桑柏生发方水提液刺激细胞分泌VEGF的作用与之相当(P0.05),桑柏生发方醇提液组能显著促进人毛乳头细胞分泌VEGF (P0.05)。与空白对照组相比,桑柏生发方水提液组能抑制细胞分泌IL-1 β(P0.05),醇提液组和阳性对照组无统计学差异(P0.05)；与阳性对照组相比,水提液组能显著抑制IL-1 β的分泌(P0.05),醇提液组无统计学差异(P0.05)。与空白对照组相比,水提液组与醇提液组均能促进TNF-α的分泌与表达(P0.01,P0.05)；与阳性对照组对比,桑柏生发方水提液组与醇提液组无统计学差异(P0.05)。RT-PCR结果提示：与空白对照组相比,桑柏生发方醇提液组VEGFmRNA表达量显著提高(P0.01),桑柏生发方水提液组VEGFmRNA表达量与阳性对照组无统计学差异(P0.05)；与阳性对照组相比,桑柏生发方醇提液提高VEGFmRNA的表达能力显著(P0.01)。与空白对照组相比,桑柏生发方水提液组与桑柏生发方醇提液组均能抑制IL-1β mRNA表达(P0.01);与阳性对照组相比,桑柏生发方水提液组和醇提液组抑制IL-1β mRNA表达能力无统计学差异(P0.05)。与空白对照组相比,桑柏生发方水提液组对TNF-α mRNA表达无影响(P0.05),桑柏生发方醇提液组能促进TNF-α mRNA的表达(P0.05)；与阳性对照组对比,水提液组和醇提液组无差异(P0.05)。细胞周期与凋亡检测结果显示桑柏生发方提取液能显著减少细胞凋亡,帮助休眠期细胞重新进入生长期,差异有统计学意义。流式细胞表面受体实验提示：与空白对照组相比,桑柏生发方水提液组能促进细胞表面表达VEGFR的水平(P0.05),桑柏生发方醇提液组与阳性对照组细胞表面表达VEGFR的水平无差异(P0.05)；与阳性对照组相比,水提液组能明显促进细胞表面VEGFR表达(P0.05),醇提液组无差异(P0.05)；与空白组对比,桑柏生发方水提液组、桑柏生发方醇提液组和阳性对照组均能抑制人毛乳头细胞表面IL-1R的表达(P0.05)；与阳性对照组相比,水提液组与醇提液组对人毛乳头细胞表面IL-1β受体表达的抑制能力无统计学差异(P0.05)；与空白对照组相比,桑柏生发方醇提液组能促进人毛乳头细胞表面TNF-αR的表达(P0.05),桑柏生发方水提液组和阳性对照组对细胞表面TNF-αR的影响能力不明显(P0.05)；与阳性对照组相比,醇提液组显著促进TNF-αR的表达(P0.05),水提液组与阳性对照组相比无统计学差异(P0.05)。结论：桑柏生发方可能是通过促进人毛乳头细胞合成和分泌VEGF、促进毛囊进入遗传物质和蛋白质的合成期以及抑制毛乳头细胞进入早期凋亡达到刺激人毛乳头细胞增殖、促进毛发新生的作用；通过抑制炎症因子IL-1β的合成和分泌达到抑制局部炎症反应、促进修复受损毛囊作用；通过促进TNF-α的合成和分泌达到保护毛囊的作用。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of different extracts of mulberry bark on vascular endothelial growth factor ( VEGF ) , interleukin - 1尾 ( IL - 1尾 ) and tumor necrosis factor - 伪 ( TNF - 伪 ) in hair regeneration by means of MTT assay . Compared with the control group , there was no significant difference in the expression of VEGF mRNA ( P0.05 ) . Compared with the control group , there was no statistical difference between the aqueous extract group and alcohol extract group ( P0.05 ) . Compared with the control group , there was no statistical difference between the aqueous extract group and the alcohol extract group ( P0.05 ) . Compared with the positive control group , the expression of TNF - 伪R in human hair papilla cells was not significantly different between the aqueous extract group and the positive control group ( P0.05 ) .

【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R275

【参考文献】