高频超声引导深刺“环跳”穴对坐骨神经损伤大鼠磷酸化p38、p53蛋白表达的影响
本文关键词：高频超声引导深刺“环跳”穴对坐骨神经损伤大鼠磷酸化p38、p53蛋白表达的影响 出处：《辽宁中医药大学》2016年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：目的:本研究通过制作坐骨神经卡压损伤大鼠模型,利用小动物超声影像系统引导针刺深度,采取神经电生理、坐骨神经功能指数、蛋白质免疫印迹法和免疫组化技术等,观察大鼠坐骨神经损伤修复情况以及背根神经节磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38Mitogen-activated Protein Kinase,p38MAPK)、p53蛋白表达变化,探讨深刺“环跳”对坐骨神经损伤大鼠神经细胞凋亡抑制作用以及对p38MAPK信号通路的影响。材料与方法:SPF级SD大鼠48只,月龄2-3个月,体质量(250±50)g,雌雄各半。按照随机数字表法随机分为4组,包括空白对照组(Na?ve group)、坐骨神经卡压模型组(Cuff group)、环跳浅刺组(shallow EA-GB30 group)、环跳深刺组(deep EA-GB30 group),每组12只。根据Mackinnons等方法制作坐骨神经硅胶管卡压损伤大鼠模型,于造模第14d、28d测定神经电生理和坐骨神经功能指数。空白组和模型组常规喂养,作固定处理。治疗组分别在小动物超声影像系统引导下行针刺治疗,环跳深刺组毫针针刺深度约皮下12-14mm,以针尖触及坐骨神经干为宜;环跳浅刺组毫针针刺深度约皮下5-8mm,以针尖至环跳穴下方肌肉层,不触及坐骨神经干为度。连接SDZ-Ⅱ电针治疗仪,电针采用疏密波,频率2/100Hz,电流1m A,刺激时间15min,电针治疗1次/d,连续治疗14d。治疗结束后大鼠取材,取坐骨神经损伤处上下共11mm组织、患侧L4-L5背根神经节,苏木精-伊红染色法观察坐骨神经形态变化,原位末端标记法(Td T-mediated d UTP nicked labeling,TUNEL)检测L4-L5背根神经节神经细胞凋亡数,蛋白质免疫印迹法和免疫组化技术分别检测坐骨神经损伤处白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、环氧合酶-2(Cyclooxygenase 2,COX-2),患侧L4-L5背根神经节MAPK激酶(Mitogen-activated protein kinase kinase 3,MKK3)、磷酸化p38(Phosphor-p38,P-p38)、磷酸化p53(Phosphor-p53,P-p53)蛋白表达水平,并对数据进行统计学分析。结果:1.神经电生理检测造模第14d,与空白对照组比较,造模组有明显差别(P0.05),造模第28d,治疗组与模型组差异明显(P0.05),环跳深刺组大鼠坐骨神经干运动神经传导速度(Motor nerve conductive velocity,MNCV)大于环跳浅刺组(P0.05)。2.坐骨神经功能指数(Sciatic nerve function index,SFI)造模第14d,空白对照组与坐骨神经卡压模型组对比有明显差别(P0.05),造模第28d,治疗组与模型组差异明显(P0.05),环跳深刺组大鼠坐骨神经SFI评价高于环跳浅刺组(P0.05)。3.坐骨神经苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE染色)大鼠坐骨神经损伤处HE染色结果显示:空白组坐骨神经神经纤维分布均匀,结构致密,髓鞘、朗飞结清晰可见;与空白组比较,模型组坐骨神经纤维排列紊乱,轴突崩解,部分髓鞘呈空泡状;电针治疗组坐骨神经神经纤维排列较规则,部分髓鞘脱落,雪旺细胞增殖明显,其中环跳深刺组神经纤维排列更规则。4.原位末端标记法(Td T-mediated d UTP nicked labeling,TUNEL)检测结果TUNEL法标记结果显示:凋亡的神经元显示为细胞皱缩明显,细胞核固缩,或细胞破裂成碎片状;空白组可见少量凋亡细胞,治疗组标记的凋亡细胞数明显少于模型组(P0.05),深刺组神经细胞凋亡数低于浅刺组,差异具有统计学意义(P0.05)。5.免疫组化、蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)检测与空白组比较,模型组IL-1β、COX-2在坐骨神经损伤部位表达增多(P0.05);与模型组比较,治疗组IL-1β、COX-2表达下降,差别有统计学意义(P0.05),其中深刺组表达水平低于环跳浅刺组(P0.05)。P-p38在空白组中少量呈现,细胞呈棕黄色的包浆,或细胞核着色,多呈圆形或椭圆形;与空白组比较,模型组P-p38表达水平升高(P0.05);治疗组P-p38蛋白表达水平低于模型组,差异明显(P0.05),其中深刺组表达水平低于浅刺组(P0.05)。MKK3表达水平:与空白组比较,模型组表达水平上升,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,治疗组MKK3表达水平下降,差异明显(P0.05),其中深刺组表达水平低于浅刺组(P0.05)。P-p53表达水平:模型组与空白组比较差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,治疗组P-p53表达水平下降,差异具有统计学意义(P0.05),其中深刺组下降幅度大于浅刺组(P0.05)。结论:1.电针“环跳”穴不同组织部位,能明显改善坐骨神经神经电生理和坐骨神经功能指数,改善坐骨神经病理形态学变化,“环跳”深刺组疗效优于浅刺组。2.电针“环跳”穴不同组织部位,能明显抑制炎症因子IL-1β、COX-2在坐骨神经损伤处表达;降低L4-L5背根神经节神经细胞凋亡数,同时还能抑制患侧背根神经节MKK3P-p38、P-p53蛋白磷酸化表达,提示电针“环跳”穴对坐骨神经损伤大鼠神经细胞凋亡抑制作用,可能是通过调节p38MAPK信号转导通路来实现的。3.电针深刺“环跳”穴对坐骨神经损伤大鼠MNCV、SFI、坐骨神经病理形态改变,以及其抑制神经元凋亡,调控p38MAPK信号转导通路相关影响,可能与深刺“环跳”穴触及神经干有关。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of deep needling on the apoptosis of sciatic nerve in rats with sciatic nerve injury induced by sciatic nerve injury in rats . The expression level of interleukin - 1尾 ( IL - 1尾 ) , phosphorylated p38 ( P - p38 ) , phosphorylated p53 ( P - p38MAPK ) , phosphorylated p38 ( P - p38 ) and phosphorylated p53 ( P - p53 ) in sciatic nerve were significantly different ( P0.05 ) . Compared with the blank group , the expression level of IL - 1尾 and COX - 2 in the treatment group was lower than that in the model group ( P0.05 ) . The expression level of P - p38 protein in the treatment group was lower than that in the model group ( P0.05 ) . Conclusion : 1 . Compared with model group , the expression level of P - p53 in sciatic nerve is significant ( P0.05 ) .
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R245
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，本文编号：1393910
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