COPD模型大鼠呼吸功能改变对尿量的影响

发布时间：2018-01-15 09:29

  本文关键词：COPD模型大鼠呼吸功能改变对尿量的影响　出处：《北京中医药大学》2016年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的肺主通调水道,作为中医肺的功能的组成部分,被广泛应用于临床。本研究将从文献综述、理论探讨、实验研究三个部分探讨肺主呼吸与尿量的关系及其调控机制。方法1 理论研究运用文献学方法探讨肺主通调水道的研究进展,分析与慢性阻塞性肺疾病(COPD)缺氧相关的生物活性物质及其对尿量的调节作用。研究肺主通调水道在《伤寒论》、《金匮要略》中的体现及临床应用,阐释宣肺作用机理及中药桔梗、三拗汤的宣肺作用,探讨水通道蛋白在水液代谢中的作用机制。2实验研究将60只SPF级健康、Vistar大鼠随机分成正常组、模型组、桔梗组、三拗汤组,模型组、桔梗组、三拗汤组大鼠运用熏烟联合脂多糖(LPS)方法复制COPD模型,造模第21天-28天,桔梗组、三拗汤组大鼠分别灌胃中药煎液,正常组、模型组大鼠给与等量的蒸馏水灌胃。造模结束后,运用anires2005系统分析肺功能,HE染色法观察大鼠肺组织、肾组织形态学变化,代谢笼法收集检测大鼠尿量,免疫组化法检测大鼠肾组织水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白2(AQP2)蛋白表达情况,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测肾组织AQP1、AQP2基因表达情况,酶联免疫吸附(Elisa)法检测大鼠血清一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、抗利尿激素(ADH)、前列腺素E2(PGE2)、心钠素(ANP)、血管紧张素Ⅱ (Ang Ⅱ)的含量。结果1理论研究关于肺主通调水道的临床研究,主要集中于水液代谢异常采用宣肺法的治疗上,临床症状方面,集中于水肿、尿量改变(少尿、癃闭、尿频等)、痰饮三个方面。实验研究方面,已经发现肺与通调水道之间存在着某种通路。水通道蛋白中,对尿量调节关系最密切的为AQP1和AQP2。肺组织缺氧时,会导致某些生物活性物质的活性增强或减低。而这些生物活性物质中的一部分亦存在于肾组织中,或可对尿量起到调控作用。包括NO、ET-1、ADH、ANP、PGE2和Ang Ⅱ。《伤寒论》、《金匮要略》在水液代谢类疾病的描述和治疗中,十分重视肺所起的作用。肺失宣降,水道失于通调会出现水肿、小便不利、下利、四肢沉重疼痛、遗尿等表现,而对于水气、水饮等水液代谢失常类疾病,亦可结合宣肺利水之法,用药主要有麻黄、杏仁等宣降肺气之品。中药桔梗宣肺,化痰,利咽,排脓,宣肺功能为其他三个功能的基础,故为宣肺中药的代表。三拗汤麻黄宣肺散寒平喘,杏仁降肺化痰,生甘草调和麻黄杏仁之宣降,共奏宣肺化痰平喘之功,可作为宣肺方剂的代表。2实验研究2.1一般情况正常组大鼠整体情况良好,未见明显异常；熏烟过程中,可观察到模型组、桔梗组及三拗汤组大鼠出现呼吸加快,腹式呼吸加重,打喷嚏,活动减少,喜聚成堆等反应；灌胃给药后桔梗组及三拗汤组大鼠呼吸急促减轻。2.2肺组织形态正常组大鼠支气管和肺组织结构清晰,支气管黏膜上皮排列整齐。模型组大鼠肺泡结构紊乱,肺泡壁血管充血明显。桔梗组、三拗汤组大鼠肺泡结构基本正常,肺泡壁血管充血不明显。2.3肾组织形态各组大鼠肾小球、肾小管形态结构基本正常。2.4肺功能检测与正常组大鼠比较,模型组大鼠FVC、FEV1、FEV1/FVC%降低,桔梗组、三拗汤组大鼠FVC、FEV1降低,差异有统计学意义。与模型组大鼠比较,桔梗组、三拗汤组大鼠FVC、FEV1、FEV1/FVC%升高,差异有统计学意义。2.5尿量检测造模前,各组大鼠24h尿量差异无统计学意义。给药后,与正常组比较,模型组大鼠24h尿量减少,差异有统计学意义。与模型组比较,三拗汤组大鼠24h尿量增多差异有统计学意义。桔梗组大鼠尿量与模型组大鼠尿量差异无统计学意义。2.6肾组织AQP1mRNA、AQP2mRNA 相对含量与正常组比较,模型组大鼠AQP1mRNA、AQP2mRNA相对含量升高,差异有统计学意义。与模型组比较,三拗汤组大鼠AQP1mRNA、AQP2mRN A相对含量降低,差异有统计学意义。2.7肾组织AQP1、AQP2蛋白表达与正常组比较,模型组大鼠AQP1、AQP2蛋白表达增多,差异有统计学意义。与模型组比较,三拗汤组大鼠AQP1、AQP2蛋白表达减少,差异有统计学意义。2.8肺组织、血清、肾组织NO、ET-1、ADH、PGE2、ANP、Ang Ⅱ含量(1)NO含量：与正常组比较,模型组大鼠肺组织、血清、肾组织NO含量降低,差异有统计学意义。与模型组比较,三拗汤组大鼠血清、肾组织NO含量升高,差异有统计学意义。(2)ET-1含量：与正常组比较,模型组大鼠血清、肾组织ET-1含量升高,差异有统计学意义。(3)ADH含量：与正常组比较,模型组大鼠肺组织、血清ADH含量升高,肾组织血清含量降低,差异有统计学意义。与模型组比较,桔梗组大鼠肾组织ADH含量升高,差异有统计学意义。(4)PGE2含量：与正常组比较,模型组大鼠肺组织、血清、肾组织PGE2含量降低,差异有统计学意义。与模型组比较,桔梗组大鼠血清PGE2含量升高,三拗汤组大鼠肺组织、血清、肾组织PGE2含量升高,差异有统计学意义。(5)ANP含量：与正常组比较,模型组大鼠肺组织、血清、肾组织ANP含量升高,差异有统计学意义。与模型组比较,桔梗组、三拗汤组大鼠肾组织ANP含量降低,差异有统计学意义。(6)AngⅡ含量：与正常组比较,模型组大鼠肺组织、血清、肾组织AngⅡ含量升高,差异有统计学意义。与模型组比较,桔梗组、三拗汤组大鼠肺组织、血清、肾组织AngⅡ含量降低,差异有统计学意义。结论1肺主呼吸与通调水道之间存在着密切的关系,NO、ANP、ET-1、PGE2、ADH、AngⅡ含量变化参与COPD模型大鼠呼吸功能损伤对尿量的调节过程,这可能是肺主通调水道的重要生物学机制之一。2中药桔梗可以改善COPD大鼠的肺功能,但对尿量、水通道蛋白无明显改善作用,对生物活性物质的调节作用亦不明显,从另一个角度说明了肺的通调水道功能以肺的宣发肃降为基础。3三拗汤恢复COPD大鼠肺功能的同时,其尿量亦改善,说明三拗汤治疗COPD疗效确切,从另一个方向验证了肺主呼吸与通调水道的密切联系,而NO、PGE2、 AngⅡ、ANP、ADH作为中间环节,参与了肺对通调水道的调节作用。特色与创新之处1从观察生物活性物质入手,探讨肺主“通调水道”即调节水液代谢的现代生物学机制。为开拓中医藏象学理论研究新思路,提供方法学借鉴。2采用形态学、免疫学、分子生物学等技术,从生物活性物质入手,通过动物实验,针对“肺主通调水道”的调控机制,开展多因素、多水平、多指标的观察研究,为揭示“肺为水之上源”的实质、阐明“提壶揭盖”法的作用机制提供实验依据,创新并丰富中医基础理论内涵。
[Abstract]:The main purpose of lung water passage, as part of TCM lung function, is widely used in clinic. This study from the literature review, theoretical study, experimental study of three parts to discuss the relationship and regulatory mechanism of lung respiration and urine volume. Methods 1 theoretical study using the literature research progress of lung regulating channel to investigate the method and analysis of chronic obstructive pulmonary disease (COPD) and hypoxia related bioactive substances regulating effect on urine volume. Research on lung water passage in "Treatise on Febrile Diseases >, < > in the embodiment of Jinkui yaolue and clinical application, mechanism and interpretation of Xuanfei A.DC, three Decoction the effect of Xuanfei, experimental Study on Mechanism of.2 water channel protein in water metabolism in 60 SPF healthy Vistar rats were randomly divided into normal group, model group, jiegeng group, three Decoction group, model group, jiegeng group, three Decoction group rats by fumigation combined 鍚堣剛澶氱硸(LPS)鏂规硶澶嶅埗COPD妯″瀷,閫犳ā绗，

本文编号：1427729