糖肾合剂干预糖尿病大鼠肾脏巨噬细胞变化治疗糖尿病肾病的研究

发布时间：2018-03-13 04:20

  本文选题：糖尿病肾病　切入点：炎症　出处：《南京中医药大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景：糖尿病肾病(DN)的发生和发展涉及到多方面因素,目前研究提示炎症反应在它的发生发展中有着不容忽视的作用。在炎症反应中巨噬细胞占据着重要的地位。巨噬细胞的浸润与血糖的升高、肾功能的恶化及肾脏纤维化密切相关。M1、M2是巨噬细胞两种不同的表型。M1型巨噬细胞及其分泌的炎症因子在DN肾组织中明显增多,使局部的炎症反应增强,引起肾脏损伤。M2型巨噬细胞可以分泌抗炎因子,并可抑制M1型活化,促进组织修复。现代医学对DN的治疗还未达到理想的效果,而中药在这方面显示出了优势。多种中药和复方已被证实可以减少炎症介质、减慢DN进展的速度,但单味中药或复方对巨噬细胞表型有无影响尚无研究。糖肾合剂为导师姚源璋教授治疗DN的经验方剂,在临床治疗中取得了很好的疗效。既往的研究表明组方中的补益类中药起到抗纤维化作用,解毒类中药可以抑制炎症信号通路。但该方剂对DN治疗的作用机理尚不明确,是否影响了巨噬细胞的变化,还需进一步探索。目的：观察糖尿病大鼠肾脏组织中M1型、M2型巨噬细胞及炎症介质肿瘤坏死因子-α的变化；通过糖肾合剂及拆方干预DN大鼠模型,观察糖肾合剂对肾组织中不同表型巨噬细胞的影响,探讨糖肾合剂治疗DN的机制。方法：高脂饮食联合低剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立DN大鼠模型。成模后的大鼠随机分为模型组(MX),糖肾高组(TG)、糖肾低组(TD)、解毒高组(DG)、解毒低组(DD)、黄芪高组(HG)、黄芪低组(HD)、阿托伐他汀组(AT)。各治疗组予以相应的治疗药物灌胃,模型组和正常组予以生理盐水灌胃。记录成模时和药物干预后大鼠的体重、血糖；检测药物干预后的尿蛋白定量、血清白蛋白、肌酐、尿素氮、总胆固醇；蛋白质印迹法(Western Blot)检测肾皮质蛋白中M1型巨噬细胞标志物(诱导型一氧化氮合酶iNOS)、M2型巨噬细胞标志物(CD163)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达；光镜下观察经苏木素伊红染色(HE)的肾组织病理改变；免疫组化测iNOS、CD163在肾小球内的阳性染色表达。应用SPSS17.0软件进行统计学比较。结果：(1)24小时尿蛋白定量：模型组、解毒高组、黄芪高组、黄芪低组、阿托伐他汀组均高于正常组；模型组明显高于糖肾高组、糖肾低组、解毒高组、解毒低组、黄芪高、低组、阿托伐他汀组(P0.01)；糖肾高组、糖肾低组尿蛋白定量低于解毒组、黄芪组(P0.05)；糖肾高组、糖肾低组、解毒高组、黄芪高组治疗效果优于阿托伐他汀组(P0.05)。(2)血清白蛋白：与正常组相比,模型组血清白蛋白水平明显降低(P0.01)；与模型组相比,糖肾高、低组、解毒高、低组、黄芪高、低组、阿托伐他汀组均可升高DN大鼠血清白蛋白；糖肾高、低组白蛋白较阿托伐他汀组升高(P0.05)。(3)’肾功能：与正常组相比,模型组肌酐、尿素氮明显升高(P0.01)；与模型组相比,糖肾高组、糖肾低组血清肌酐、尿素氮均出现下降(P0.05)；与阿托伐他汀组相比,糖肾高组、糖肾低组血清肌酐、尿素氮有所下降,但无统计学意义(P0.05)。黄芪高、低组、解毒高、低组与模型组相比,肌酐、尿素氮未见明显下降。(4)血清胆固醇：模型组高于正常组(P0.05)；阿托伐他汀组、糖肾高、低组、解毒高组低于模型组(P0.05)；各治疗组与阿托伐他汀组相比,无统计学差异(P0.05)(5)肾脏病理：HE染色可见模型组大鼠肾小球体积增大,球囊囊壁增厚,部分粘连,肾小球毛细血管丛有分叶,小球内系膜基质增生,局部中-重度增生,基底膜增厚,部分区域肾小球局灶硬化；肾小管上皮变性、脱落,肾小管局灶扩张,间质纤维化,并可见散在炎症细胞浸润。糖肾高组肾小球改变轻微,未见明显硬化肾小球,系膜轻度增生;少量小管轻度扩张、萎缩,少许区域见灶性炎症细胞浸润,未见纤维化形成。糖肾低组肾小球系膜轻-中度增生,球囊局灶轻度粘连,未见硬化肾小球；肾小管扩张,可见蛋白管型,轻度散在炎症细胞浸润,病变较模型组减轻。黄芪高、低组、解毒高、低组和阿托伐他汀他汀组系膜基质中-重度增生,部分区域有硬化现象,小管上皮细胞空泡变性,散在炎性细胞浸润,较模型组减轻,但效果不及糖肾高、低组。黄芪高、低组、解毒高、低组的系膜区增生、小球硬化较阿托伐他汀组减轻。(6)免疫组化：正常组肾小球和肾间质内几乎检测不到iNOS(M1型巨噬细胞)和CD163(M2型巨噬细胞)。模型组肾小球、肾间质内可见大量的M1型巨噬细胞,少许的M2型巨噬细胞。阿托伐他汀组、糖肾高、低组、解毒高、低组、黄芪高、低组肾组织内的M1型巨噬细胞较模型组减少,M2型巨噬细胞增多(P0.05)。糖肾高、低组M1型巨噬细胞较阿托伐他汀组减少,M2型巨噬细胞较其增加。黄芪高、低组、解毒高、低组内的M1、M2型巨噬细胞与阿托伐他汀组相似,无统计学差异(P0.05)。(7)Western Blot结果：正常组肾组织蛋白内几乎检测不到iNOS、TNF-α蛋白和少量的CD163蛋白。模型组检测到大量的iNOS、TNF-α和少许的CD163。糖肾高、低组、解毒高、低组、黄芪高、低组、阿托伐他汀组提取出的蛋白均存在iNOS、TNF-α和CD163,且iNOS、TNF-α表达量较模型组减少,CD163的表达较模型组增多(P0.01)。糖肾高、低组、黄芪高组、解毒高组iNOS蛋白、TNF-α较阿托伐他汀组减少(P0.05)；各中药治疗组的高剂量降低iNOS、TNF-α效果优于低剂量组(P0.05)。糖肾高、低组内的iNOS、TNF-α较黄芪组、解毒组均低(P0.05)。TNF-α的表达随着iNOS的增多而增多,与iNOS的表达呈正相关。糖肾高、低组、黄芪高、低组、解毒高、低组内CD163的表达较阿托伐他汀组增多(P0.01)。糖肾高、低组内的CD163较黄芪组、解毒组均增高(P0.05)结论：(1)M1、M2型巨噬细胞在DN大鼠模型中的数量均增加,尤以M1型增多更为明显。M1型相关炎症因子TNF-α的表达也随M1型巨噬细胞的增多而增强。这种变化提示了不同表型的巨噬细胞均参与了DN的炎症反应。(2)糖肾合剂可降低24小时尿蛋白、血清肌酐、尿素氮、总胆固醇,升高血清白蛋白、减轻肾脏病理改变。糖肾合剂通过抑制M1型巨噬细胞的浸润,下调TNF-α的表达,促进M2型巨噬细胞的活化来实现对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。(3)糖肾合剂组成中的黄芪、解毒利湿类药物对巨噬细胞的影响同糖肾合剂相似,但M1型的降低、M2型的增高程度均不如糖肾合剂。降低尿蛋白定量、升高白蛋白效果也不及糖肾合剂。单独使用黄芪、解毒利湿类中药治疗时,未能明显改善肾功能。解毒利湿类中药可以降低血清总胆固醇。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R259

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本文编号：1604786