一种酸性党参多糖CPP1b的结构分析及抗肿瘤活性研究

发布时间：2016-11-13 11:13

  本文关键词：党参多糖的分析及抗肿瘤活性研究，由笔耕文化传播整理发布。

《兰州大学》 2013年

一种酸性党参多糖CPP1b的结构分析及抗肿瘤活性研究

杨春霞  

【摘要】：党参(Codonopsis pilosula)是一种常用中药。含有多糖,皂甙,倍半萜类,多酚类,甙类,生物碱类,挥发油等多种成分。党参多糖作为党参中重要活性成分之一,因具有广泛的生理活性而引起了药学和相关工作者的广泛关注,然而均一性的党参多糖的研究鲜有报道。本研究系统的研究了党参多糖提取、分离及纯化工艺及其抗肿瘤和抗氧化活性。以期对党参多糖的进一步开发利用提供理论基础。具体研究内容如下： (1)党参多糖的提取工艺研究：采用中心组合设计及响应曲面法,以粗多糖产率及糖含量双指标进行优化。结果表明,两个指标的优化条件有一定的的差异,而最终确定的提取工艺为：提取温度91℃,提取时间120min,液料比9,提取次数4次。该工艺下粗多糖产率为为47.15%,糖含量为18.89%。 (2)党参多糖中硒含量测定：按(1)工艺进行党参多糖提取,党参多糖提取液浓缩至适当提及,分取]/2体积,用80%乙醇沉淀多糖,冷冻干燥后得党参总多糖CPP(粗糖),其余1/2提及一次用30%,50%,70%,80%的乙醇进行分级沉淀,冷冻干燥后的党参多糖CPP1、CPP2、CPP3、CPP4。采用氢化物发生原子荧光分光度法测定了CPP1,CPP2,CPP3和CPP4中的硒含量,及不同产地党参总糖中的有机硒含量。实验结果证实党参中的有机硒主要分布于党参多糖中,分级沉淀的党参多糖硒含量主要集中在分子量较小部分 (3)党参多糖的抗氧化作用研究：系统研究了不同产地的党参总糖及分级党参多糖CPP1,CPP2,CPP3,CPP4对O2-、·OH及DPPH的清除作用。对比各产地党参总糖对三种自由基的清除率,文党总糖对三种自由基的清除作用均较强,其对自由基的清除能力依次为：·OH·DPPH·O2-.不同级分多糖对·OH及DPPH三种自由基的清除作用用显强于党参总糖。本实验还对比研究了CPP1纯化前后的抗氧化活性。结果显示,纯化后CPP1对·O2-及·OH的清除作用变强,而对DPPH的清除作用变弱,说明多糖的纯化过程对其抗氧化活性影响较大 (4)党参多糖CPP1b的分离纯化、结构表征及抗肿瘤活性研究：A. CPP1b结构表征：CPP1经除蛋白、脱色素、透析、DE-52及Sephadex G200洗脱,得到三个纯化的酸性党参多糖(CPPla, CPPlb.CPP1c),重点研究了其中一个酸性多糖(CPPlb)的结构。凝胶渗透色谱—多角度激光散射仪连用技术(HPGPC—MALLS)研究结果显示其重均分子量(Mw)及均方根半径(Rg)分别大约为1.45×105Da,29.7nm,聚分散系数Mw/Mn为1.20,在0.9%NaCl溶液中呈无规线团结构。进一步通过甲基化分析、气质连用、一维及二维核磁分析,确定CPP1b的分子结构为：主链由1→4连接的含乙酰氧基半乳糖醛酸(α-D-GalpA3Ac),1→6连接的含乙酰氧基和乙酰氨基的半乳糖(α-D-Galp3Ac4NAc),及1→2连接的鼠李糖(β-L-Rhap)组成,支链α-L-Arap连接于半乳糖2位。推断CPP1b结构的重复单元为：CPP1b的扫描电镜(SEM)图、透射电镜(TEM)图、原子力显微镜(AFM)图进一步验证了CPP1b的结构。 B.CPP1b的抗肿瘤活性研究：采用噻唑蓝(MTT)法研究了CPP1b在不同浓度下对人肺癌细胞A549的抑制作用,结果显示CPP1b具有较强的抗肿瘤活性,且随着浓度增加抑制活性增强。实验还研究了CPP1b对甲氨蝶呤(MTX)的辅助抗肿瘤活性结果表明CPP1b对MTX的抗肿瘤活性具有明显的协同作用。

【关键词】：
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R284;R285
【目录】：

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