针刺环跳和夹脊对坐骨神经损伤大鼠cAMP信号通路影响的比较研究

发布时间：2018-04-11 11:35

  本文选题：坐骨神经损伤 + 针刺　； 参考：《辽宁中医药大学》2016年硕士论文

【摘要】：目的:本课题旨在研究针刺环跳穴和夹脊穴对坐骨神经钳夹损伤模型大鼠的不同疗效。以免疫组化和蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)检测方法,观察大鼠背根神经节中蛋白激酶A(protein kinase,PKA)、c AMP反应元件结合蛋白(c AMP response element binding protein,CREB)和原癌基因蛋白(c-fos)含量的表达,探讨针刺治疗大鼠坐骨神经损伤中环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)细胞信号转导通路的作用机制,比较环跳穴和夹脊穴修复坐骨神经损伤的作用差异。材料与方法:选用SPF级健康SD大鼠48只,雌雄各均,按照随机数字表法将其分为四组:空白组、模型组、环跳组、夹脊组,4组,每组12只。采用Hasegawa[1]设计的、廖维靖[2]和王维[3]的改良钳夹法制成大鼠坐骨神经急性损伤模型。空白组和模型组在相同条件下,正常饲养,于造模后第8天,将大鼠固定于大鼠固定器上,每次15 min,每日1次,连续14天。环跳组和夹脊组造模后第8天,分别针刺环跳穴和夹脊穴。连接SDZ-Ⅱ电针仪进行治疗,每次治疗15 min,每日一次,连续治疗14天。造模后第22天结束治疗,行为学观察通过检测大鼠坐骨神经功能指数来评价各组大鼠的肌力及运动功能恢复情况。在大鼠左侧臀骨交界处切开约1.5 cm长的切口,暴露坐骨神经,截取损伤点上下各5 mm;然后再将大鼠背部正中皮肤纵向切开,打开椎管,截取L4-L5节段脊髓。形态学观察通过HE染色法观察坐骨神经病理形态的变化。分子生物学检测法,观察大鼠L4-L5节段脊髓及背根神经节区域PKA、CREB和c-fos的表达强度,所得结果进行统计学分析。结果:1.坐骨神经功能指数(Sciatic nerve function index,SFI)采用大鼠坐骨神经功能指数观察大鼠患肢的功能恢复情况。造模后第8天,与空白组比较,坐骨神经钳夹模型大鼠各组的SFI明显低于空白组,差异有统计学意义(p0.05),说明大鼠的运动功能减退且造模成功。造模后第22天,与模型组比较,环跳组和夹脊组均有显著的提高,差异有统计学意义(p0.05),说明针刺治疗可以促进大鼠坐骨神经损伤的恢复和再生。环跳组大鼠坐骨神经SFI评价优于夹脊组,差异有统计学意义(p0.05)。2.苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE染色)大鼠坐骨神经损伤处HE染色结果显示:空白组坐骨神经神经内轴突、髓鞘连续性良好,纤维分布整齐;与空白组比较,模型组神经纤维分布不规则,轴突、髓鞘破溃,部分出现崩解;环跳组和夹脊组中坐骨神经纤维分布比较规则,部分神经出现新的生长,部分髓鞘脱落,其中环跳组优于夹脊组。3.免疫组织化学检测PKA:空白组中PKA在L4-L5背根神经节中大量表达,阳性胞核呈蓝色,胞浆呈棕褐色;与空白组相比,其余各组大鼠L4-L5背根神经节中PKA蛋白表达水平显著下调(p0.01);与模型组相比,空白组、环跳组、夹脊组上调明显(p0.01);与环跳组比较,夹脊组下调,差异有统计学意义(p0.05)。CREB:空白组中CREB在L4-L5背根神经节中大量表达,阳性胞核呈蓝色,胞浆呈棕褐色;与空白组相比,其余各组大鼠L4-L5背根神经节中CREB蛋白表达水平显著下调(p0.01);与模型组相比,空白组、环跳组、夹脊组上调明显(p0.01);与环跳组比较,夹脊组下调,差异有统计学意义(p0.05)。c-fos:空白组中c-fos在L4-L5背根神经节中少量表达,与空白组相比,其余各组大鼠L4-L5背根神经节中c-fos蛋白表达水平显著上调(p0.01);与模型组相比,空白组、环跳组、夹脊组下调明显(p0.01);与环跳组比较,夹脊组上调,差异有统计学意义(p0.05)。4.Western Blot检测PKA:空白组中PKA在L4-L5背根神经节中大量表达,与空白组相比,模型组、夹脊组大鼠L4-L5背根神经节中PKA蛋白表达水平显著下调(p0.01);与模型组相比,空白组、环跳组、夹脊组上调明显(p0.01);与环跳组比较,夹脊组明显下调,差异有统计学意义(p0.01)。CREB:空白组中CREB在L4-L5背根神经节中大量表达,与空白组相比,其余各组大鼠L4-L5背根神经节中CREB蛋白表达水平显著下调(p0.05);与模型组相比,空白组、环跳组、夹脊组上调明显(p0.05);与环跳组比较,夹脊组下调,差异有统计学意义(p0.05)。c-fos:空白组中c-fos在L4-L5背根神经节中少量表达,与空白组相比,模型组、夹脊组大鼠L4-L5背根神经节中c-fos蛋白表达水平显著上调(p0.01);与模型组相比,空白组、环跳组、夹脊组下调明显(p0.01);与环跳组比较,夹脊组上调,差异有统计学意义(p0.05)。结论:1.针刺环跳穴和夹脊穴,均可不同程度地促进坐骨神经损伤修复和再生,环跳组优于夹脊组。2.针刺环跳穴和夹脊穴,显著提高背根神经节中PKA和CREB的含量,激活c AMP细胞通路,抑制c-fos含量的表达,这可能是针刺促进坐骨神经损伤修复与再生的有效机制之一。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R245

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本文编号：1735872