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中药复方对TAO患者RFs中信号转导通路的影响

发布时间:2018-05-30 02:12

  本文选题:甲状腺相关眼病 + 眼球后成纤维细胞 ; 参考:《河南中医药大学》2016年硕士论文


【摘要】:目的:本研究在前期临床和实验有效基础上,探讨泻火平突散、活血平突散、养目平突散治疗TAO的机制。观察三种中药复方对IFN-?、IL-4刺激后RFs增殖的影响以及对IFN-?、IL-4刺激后RFs中ERK1/2、JNK、P38MAPK、ERK5、NF-κB等信号转导通路表达的影响。方法:1.原代、传代培养RFs并进行鉴定。眼球后结缔组织取自于眼外伤或其他眼部手术患者,取2-8代细胞进行实验。采用倒置相差显微镜察看RFs状态,并用免疫细胞化学染色法鉴定。2.IFN-γ(200U/m L)、IL-4(200U/m L)及含药血清(20%)刺激RFs后,MTT比色法检测中药含药血清对RFs活力影响。3.RFs与IFN-γ(200U/m L)、IL-4(200U/m L)以及三种含药血清共同孵育48小时后,免疫细胞化学染色检测IFN-γ、IL-4和三种含药血清对RFs中ERK1/2、JNK、P38MAPK、ERK5、NF-κB的影响。结果:1.体外成功培养出正常人眼球后成纤维细胞,光镜下观察成活细胞形态,呈放射状,多为梭形和大多角形,约6-10天逐渐生长融合成单层铺满培养瓶底。细胞鉴定结果显示纤维原细胞的标记vimentin为阳性,cytokeration为阴性,提示为实验所需纯净的球后成纤维细胞。2.在前期实验基础上,结果表明中药复方含药血清对RFs有抑制作用,并在中剂量(20%含药血清)时最为明显。3.MTT法检测三种中药复方对IFN-γ和IL-4刺激后RFs活力的影响,空白对照组、正常大鼠血清对照组两组对比无统计学意义(P0.05);正常大鼠血清+IFN-γ组、正常大鼠血清+IL-4组、正常大鼠血清+IFN-γ+IL-4组OD值均较空白对照组、正常大鼠血清对照组明显升高,有统计学意义(P0.05);药1、药2、药3干预组OD值均较正常大鼠血清+IFN-γ组、正常大鼠血清+IL-4组、正常大鼠血清+IFN-γ+IL-4组明显降低,有统计学意义(P0.05);4.免疫组化法检测ERK1/2的活性,空白对照组、正常大鼠血清对照组两组相比无统计学差异(P0.05);正常大鼠血清+IFN-γ组、正常大鼠血清+IL-4组、正常大鼠血清+IFN-γ+IL-4组ERK1/2的活性均较空白对照组、正常大鼠血清对照组明显升高,有统计学意义(P0.05);药1、药2、药3干预组ERK1/2活性均较正常大鼠血清+IFN-γ组、正常大鼠血清+IL-4组、正常大鼠血清+IFN-γ+IL-4组明显降低,有统计学意义(P0.05)。JNK、P38MAPK、ERK5、NF-κB结果同上。结论:IFN-γ、IL-4可刺激RFs的增殖。20%的中药含药血清可明显抑制RFs的增殖。中药含药血清能抑制IFN-γ、IL-4刺激后RFs中ERK1/2、JNK、P38MAPK、ERK5、NF-κB的活性表达,从而阻断信号转导通路,减少TAO的免疫损伤。
[Abstract]:Objective: to explore the mechanism of treating TAO with Xiehuaping Powder, Huoxue Pingtu Powder and Yangmu Pingtu Powder on the basis of clinical and experimental efficacy. To observe the effect of three traditional Chinese medicine prescriptions on the proliferation of RFs stimulated by IL-4 and on the expression of signal transduction pathways such as ERK1 / 2, P38MAPK5, ERK5 and NF- 魏 B in RFs stimulated by IFN-P38 MAPK5. Method 1: 1. Primary culture and identification of RFs were carried out. Retroocular connective tissue was obtained from patients with ocular trauma or other ocular surgery and 2-8 passage cells were used for the experiment. Using inverted phase contrast microscope to observe the state of RFs, Using immunocytochemical staining method to identify. 2. IFN- 纬 ~ (200UL / ml) and serum containing drug ~ (20). After stimulation of RFs, MTT colorimetry was used to detect the effect of traditional Chinese medicine containing serum on RFs activity. 3. RFs was incubated with IFN- 纬 ~ (200) / m ~ (-1) IL-4200UmL) and three kinds of drug containing serum were incubated for 48 hours, and the three kinds of drug containing serum were incubated together for 48 hours. The effects of IFN- 纬 IL-4 and three kinds of serum containing drugs on ERK1 / 2 ~ (-1 / 2) in RFs were detected by immunocytochemical staining. The result is 1: 1. The normal human Retroocular fibroblasts were successfully cultured in vitro. The living cells were radially shaped, mostly fusiform and large polygonal, and grew and fused into a monolayer filled with culture bottles for about 6-10 days. The results of cell identification showed that the labeled vimentin of fibroblasts was positive and cytokeration was negative, suggesting that the pure Retrobulbar fibroblasts. 2. On the basis of the previous experiments, the results showed that the serum containing Chinese medicine compound had inhibitory effect on RFs, and the most obvious effect of the three Chinese herbal compounds on the RFs activity after stimulation of IFN- 纬 and IL-4 was detected at the middle dose of 20% serum. The control group was the control group. There was no significant difference between normal rat serum control group and normal rat serum control group (P 0.05), normal rat serum IFN- 纬 group, normal rat serum IL-4 group and normal rat serum IFN- 纬 IL-4 group were significantly higher than that of blank control group. The OD value of the intervention group was significantly lower than that of the normal rats, the serum IL-4 group and the normal rat serum IFN- 纬 IL-4 group, which was significantly lower than that of the control group (P 0.05) and the control group (P 0.05), which was significantly lower than that of the control group. The OD value of the intervention group was significantly lower than that of the normal rat serum IFN- 纬 group and the normal rat serum IFN- 纬 IL-4 group. The activity of ERK1/2 was detected by immunohistochemical method. There was no significant difference between the two groups in the blank control group and the normal rat serum control group (P 0.05), while the normal rat serum IFN- 纬 group, the normal rat serum IL-4 group, the normal rat serum IFN- 纬 group, the normal rat serum IL-4 group. The activity of ERK1/2 in normal rat serum IFN- 纬 IL-4 group was significantly higher than that in normal rat serum control group (P 0.05), and the ERK1/2 activity in drug 1, drug 2 and drug 3 intervention group was higher than that in normal rat serum IFN- 纬 group and normal rat serum IL-4 group. The level of serum IFN- 纬 IL-4 in normal rats was significantly lower than that in control group (P 0.05). Conclusion the proliferation of RFs can be stimulated by 1: IFN- 纬 -IL-4. The proliferation of RFs can be significantly inhibited by 20% Chinese herbal serum. The serum containing traditional Chinese medicine can inhibit the activity of ERK1 / 2 in RFs stimulated by IFN- 纬 -IL-4, thus block the signal transduction pathway and reduce the immune damage of TAO.
【学位授予单位】:河南中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R276.7

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本文编号:1953447

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