高血压肝阳上亢证患者血清miRNAs表达的研究

发布时间：2018-06-07 03:10

  本文选题：高血压病 + 微小RNA(microRNA　； 参考：《福建中医药大学》2016年硕士论文

【摘要】：目的通过对比肝阳上亢证高血压患者、非肝阳上亢证高血压患者及正常人血清中微小RNA(microRNA,miRNA)的表达谱的不同,明确高血压病肝阳上亢证与miRNA之间是否存在相关性,探索高血压肝阳上亢证患者血清中是否存在特异性表达的一个miRNA或几个miRNAs。方法1.在本院体检中心及心内科门诊收集初发高血压病或非初发但是未服用降压药的高血压患者及健康体检者的空腹血清,将所收集的病例分为三组,分别是肝阳上亢组、非肝阳上亢组、健康组。2.分别抽取肘静脉血5m1,存于无抗凝的干燥试管,3000r/min离心10分钟,抽取血清,-30℃冻存。采用Trizol LS法提取血清中RNA,按照miRNeasy Mini Kit操作手册,使用吸附柱进行RNA的富集。3.利用Solexa测序方法对以上3组样本进行基因测序分析,检测出肝阳上亢组与非肝阳上亢组、肝阳上亢组与正常人群组、非肝阳上亢组与正常组之间差异表达的基因。4.利用miRNA在线预测软件miRWalk2.0整合肝阳上亢组与非肝阳上亢组、肝阳上亢组与正常人群组中共有的差异表达miRNA,筛选出可能与肝阳上亢证相关的miRNAs。5.使用实时荧光定量PCR检测筛选出的miRNAs在各组的表达量,包括其浓度及总量。结果发现肝阳上亢组与正常组的miRNA的表达量均存在明显差异(P0.01)；肝阳上亢组与非肝阳上亢组比较miRNA的表达量也存在明显差异(P0.01)；非肝阳上亢组与正常组比较miRNA的表达量无差异(P=0.26,P0.05)。肝阳上亢组与非肝阳上亢组miRNA的浓度比较存在明显差异(P0.01)；肝阳上亢组与正常组miRNA的浓度比较也存在明显差异(P0.01)；非肝阳上亢组与正常组miRNA的浓度比较无明显差异,(P=0.15,P0.05)。肝阳上亢组与正常组：共检测到miRNA1037个,其中差异表达的miRNA有653个(P0.05),表达下调的miRNA223个,表达上调的miRNA430个；非肝阳上亢组与正常组：共检测到miRNA963个,其中差异表达的miRNA有573个,表达下调的miRNA256个,表达上调的miRNA317个；肝阳上亢组与非肝阳上亢组：共检测到miRNA957个,其中差异表达的miRNA有720个,表达下调的miRNA277个,表达上调的miRNA433个。结果在高表达的基因群中发现miR-126。荧光定量结果显示肝阳上亢组miR-126的表达显著高于非肝阳上亢组与正常组(P0.01)。结论高血压肝阳上亢证形成与miRNAs有关,miR-126可能是高血压肝阳上亢证形成的特异性miRNAs之一。
[Abstract]:Objective to compare the expression profiles of small RNA (microRNA, miRNA) in serum of hypertensive patients with hyperactivity of non liver yang hyperactivity syndrome and normal people, and to find out whether there is a correlation between hyperhyperhyperactivity of liver yang hyperactivity and miRNA in hypertension, and to explore whether there is a specific expression in the serum of hyperhyperhyperactivity of hypertension. MiRNA or several miRNAs. methods 1. in the medical center of the hospital and the Department of Cardiology in the Department of Cardiology to collect the fasting serum of patients with essential hypertension or non primary but not antihypertensive drugs and health examiners. The collected cases were divided into three groups: the liver yang hyperactivity group, the non liver yang hyperactivity group, and the healthy group.2., respectively, to extract the 5m of the elbow vein blood. 1, stored in a dry test tube without anticoagulant, 3000r/min centrifugation for 10 minutes, extraction of serum and cryopreservation at -30 C. Trizol LS was used to extract RNA in serum. According to the miRNeasy Mini Kit operation manual, the adsorption column was used to enrich the RNA.3. using the Solexa sequencing method, and the above 3 groups of samples were sequenced and analyzed to detect the liver yang hyperactivity group and the non liver yang. The difference expression gene.4. between the liver yang hyperactivity group and the normal group, the non liver yang hyperactivity group and the normal group was expressed by the miRNA online prediction software miRWalk2.0 integration of the liver Yang hyperhyperactivity group and the non liver yang hyperactivity group, the liver yang hyperactivity group and the normal group expressed miRNA, and selected the miRNAs.5. related to the liver yang hyperactivity syndrome in the hyperhyperactivity group. The expression of miRNAs in each group was detected by real time fluorescence quantitative PCR, including its concentration and total amount. The results showed that the expression of miRNA in the liver yang hyperactivity group was significantly different from that of the normal group (P0.01). The expression of miRNA in the liver yang hyperactivity group and the non liver yang hyperactivity group was also significantly different (P0.01); the non liver yang hyperactivity group and the non liver yang hyperactivity group were significantly different from those in the non liver yang hyperactivity group. There was no difference in the expression of miRNA in the normal group (P=0.26, P0.05). The concentration of miRNA in the liver yang hyperactivity group and the non liver yang hyperactivity group was significantly different (P0.01); the concentration of miRNA in the liver yang hyperactivity group and the normal group was also significantly different (P0.01), and there was no significant difference in the concentration of miRNA between the non liver yang hyperactivity group and the normal group (P=0.15, P0.05). MiRNA1037 was detected in the liver yang hyperactivity group and the normal group, in which there were 653 different expressions of miRNA (P0.05), down regulated miRNA223, and up regulated miRNA430; miRNA963 was detected in the non liver yang hyperactivity group and the normal group, of which there were 573 miRNA differentially expressed, down regulated miRNA256, and up regulated miRNA317 A total of miRNA957 were detected in the liver yang hyperactivity group and the non liver yang hyperactivity group, of which there were 720 different expressions of miRNA, the expression of down regulated miRNA277, and the up regulation of miRNA433. Results in the highly expressed gene group, the miR-126. fluorescence quantitative results showed that the expression of miR-126 in the liver yang hyperactivity group was significantly higher than that in the non liver yang hyperactivity group and the positive group. Chang Group (P0.01). Conclusion the formation of hypertension with hyperactivity of liver Yang is related to miRNAs. MiR-126 may be one of the specific miRNAs of hypertension with hyperactivity of liver yang.
【学位授予单位】：福建中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R259

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本文编号：1989475