凋瘤丸对乳腺癌细胞MCF-7凋亡基因Caspase-3的影响

发布时间：2018-11-15 21:54

【摘要】：目的:本文就探讨凋瘤丸对体外培养人乳腺癌细胞株MCF-7的诱导凋亡作用及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响的论述。希望能为今后研究中药抗癌机制提供依据和思路,为临床上治疗乳腺癌提供一定的分子生物学依据,以及为该药在临床的应用提供相应的理论基础。方法:用含10%胎牛血清,1%链霉素、青霉素的MEM养液,于37℃,5%CO2孵箱中培养人乳腺癌MCF-7细胞株;1光镜形态学观察:加入凋瘤丸提取液培养48h后,取出细胞片,常规HE染色,运用光学显微镜观察并记录;2 MTT实验:将MCF-7细胞按1×105个/孔接种于96孔板,设置3个复孔,随机分为:凋瘤丸悬液高、中、低浓度药物组,阴性对照组,三苯氧胺对照组。进行MTT试验,计算出细胞增殖抑制率,筛选出最合适的药物剂量;3 Hoechst33258检测试验:取指数生长期的细胞,运Hoechst33258染色法荧光倒置显微镜观察调瘤丸药液作用后人乳腺癌细胞株MCF-7的早期凋亡情况。4 RT-PCR检测将凋瘤丸悬液高、中、低浓度药物组,阴性对照组(不做任何治疗),三苯氧胺对照组三组分别培养作用48小时后,经胰酶消化收集细胞,然后提取细胞MCF-7的RNA。检测在不同分组中caspase-3基因表达量的变化。结果显示:在光学显微镜下,凋瘤丸提取液作用过细胞体积变小、形态变圆,核被染为深蓝色,胞浆呈浅红色,核呈破碎状,染色质颜色凝集加深,凋亡小体形成等;Hoechst染色检测显示;低浓度凋瘤丸组仅见有核凹陷以及小块缺损,但结构完整;随着浓度的增加,凋亡小体(呈现胞质胞核的皱缩,染色质边集浓染,细胞核被浓染而发出亮蓝色强烈荧光,呈现出“新月状”、带状甚至破碎斑块状,又称凋亡小体)而增多,阳性对照组与实验组有相似的作用效果;MTT检测法提示:阴性对照组细胞存活率极高,增殖抑制率接近0;高中低凋瘤丸药物组以及三苯氧胺组均对MCF-7细胞的增殖均起到不同程度的抑制;而且,这种抑制程度随着药物浓度的递增而递增。最大剂量的凋瘤丸组与三苯氧胺组的效果接近。RT-PCR检测结果显示,与阴性对照组相比,各药物处理后的MCF-7细胞中caspase-3均表现为上调表达,其中凋瘤丸悬液高浓度组和三苯氧胺对照组与阴性对照组相比,具有统计学意义,(P0.05)。而凋瘤丸悬液中浓度组和凋瘤丸悬液低浓度组无统计学意义。凋瘤丸能抑制MCF-7细胞株的增殖,且呈量效的依赖性。最大浓度的结果接近三苯氧胺组无统计学差异(p0.05),与阴性对照组有统计学差异(P0.05)。结论:1.凋瘤丸对乳腺癌细胞有诱导凋亡作用,且在一定的范围内,这种抑瘤作用呈量效关系。2.凋瘤丸药物组可以影响caspase-3的表达,使其上调,且通过激活Caspase-3的表达来诱导乳腺癌细胞凋亡。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of Miaoyou pill on apoptosis induced by human breast cancer cell line MCF-7 in vitro and the expression of apoptosis-related protein Caspase-3. It is hoped that it can provide basis and train of thought for future study on anticancer mechanism of traditional Chinese medicine, provide certain molecular biological basis for clinical treatment of breast cancer, and provide corresponding theoretical basis for clinical application of this drug. Methods: human breast cancer MCF-7 cell line was cultured in 5%CO2 incubator at 37 鈩，

本文编号：2334505