针刺环跳和夹脊对坐骨神经损伤大鼠脊髓中Fas、FasL、Caspase-8表达的比较研究

发布时间：2019-02-15 18:18

【摘要】：目的:本课题是研究分别针刺环跳穴和夹脊穴对坐骨神经钳夹损伤模型大鼠的抗细胞凋亡作用。采用分子生物学检测方法,,观察大鼠神经节中Fas,Fas L及半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中Caspase-8含量的表达,进而探讨针灸治疗大鼠坐骨神经损伤中抗细胞凋亡的作用,比较分别针刺环跳穴和夹脊穴对坐骨神经损伤细胞抗凋亡作用的差异。材料与方法:参考钳夹法制作模型,制成大鼠坐骨神经急性损伤。选用SPF级SD大鼠48只,7-9周,雌雄各半,采用随机数字表法分成空白组、模型组、环跳组、夹脊组,每组各12只,空白组:正常喂养,每天将动物固定在自制的塑料筒内15分钟,尾部和后肢暴露在外,不进行治疗;模型组:在造模成功后,与空白组做相同处理;环跳组和夹脊组则选用毫针,分别针刺环跳穴和夹脊穴,并连接电针进行治疗,疗程与其他两组相同。治疗14天后,取出损伤坐骨神经钳夹处下方约2mm的坐骨神经节和同侧L4-L5节段脊髓,HE染色观察坐骨神经病理变化情况,用Western Blot等检测方法观察大鼠神经细胞凋亡因子Fas,Fas L以及Caspase-8的表达情况,根据结果进行统计学分析。结果:1.坐骨神经功能指数(SFI)造模后第8天,与空白组相比,坐骨神经钳夹模型大鼠各组的SFI明显低于空白组,差异有统计学意义(p0.05),说明大鼠SFI降低,标志造模成功。造模后第22天,与模型组相比,环跳组比夹脊组的大鼠SFI均升高(P0.05),且环跳组大鼠SFI优于夹脊组(p0.05)。可以说针刺对大鼠SFI提高起到了促进的作用。2.HE染色大鼠受损坐骨神经HE染色的变化情况。空白组坐骨神经纤维排列整齐有序,髓鞘分布均匀,轴突连续性完好;模型组神经纤维分布不紊乱,髓鞘和轴突发生裂解;与模型组相比,环跳组和夹脊组神经纤维改变相对较轻,且环跳组好于夹脊组。3.Western Blot检测:3.1 Western blot Fas检测结果四组中Fas均有不同程度的表达:(1)与空白组相比,模型组的Fas蛋白表达水平上调(p0.01)环跳组和夹脊组的Fas蛋白表达明显上调(p0.01);(2)与模型组相比,环跳组和夹脊组Fas蛋白表达下调(p0.01);(3)与夹脊组相比,环跳组Fas蛋白表达下调明显(p0.01)。3.2 Western blot Fas L检测结果四组中Fas L均有不同程度的表达:(1)与空白组相比,模型组的Fas L蛋白表达水平上调(p0.01)环跳组和夹脊组的Fas L蛋白表达明显上调(p0.01);(2)与模型组相比,环跳组和夹脊组的Fas L蛋白表达下调(p0.01);(3)与夹脊组相比,环跳组的Fas L蛋白表达下调明显(p0.01)。3.3 Western blot Caspase-8检测结果四组中Caspase-8均有不同程度的表达:(1)与空白组相比,模型组的Caspase-8蛋白表达水平上调(p0.01)环跳组和夹脊组的Caspase-8蛋白表达明显上调(p0.01);(2)与模型组相比,环跳组和夹脊组Caspase-8蛋白表达下调(p0.01);(3)与夹脊组相比,环跳组Caspase-8蛋白表达下调明显(p0.05)。4.免疫组化检测:4.1 Fas免疫组织化检测结果四组中Fas均有不同程度的表达:(1)与空白组相比,模型组的Fas蛋白表达水平上调(p0.01),环跳组和夹脊组的Fas蛋白表达明显上调(p0.01);(2)与模型组相比,环跳组和夹脊组Fas蛋白表达下调(p0.01);(3)与夹脊组相比,环跳组Fas蛋白表达下调明显(p0.01)。4.2 Fas L免疫组织化检测结果四组中Fas L均有不同程度的表达:(1)与空白组相比,模型组的Fas L蛋白表达水平上调(p0.01)环跳组和夹脊组的Fas L蛋白表达明显上调(p0.01);(2)与模型组相比,环跳组和夹脊组的Fas L蛋白表达下调(p0.01);(3)与夹脊组相比,环跳组的Fas L蛋白表达下调明显(p0.01)。4.3 Caspase-8免疫组织化检测结果四组中Caspase-8均有不同程度的表达:(1)与空白组相比,模型组的Caspase-8蛋白表达水平上调(p0.01)环跳组和夹脊组的Caspase-8蛋白表达明显上调(p0.01);(2)与模型组相比,环跳组和夹脊组Caspase-8蛋白表达下调(p0.01);(3)与夹脊组相比,环跳组Caspase-8蛋白表达下调明显(p0.05)。结论:1.针刺不同穴位,均能够改善急性坐骨神经损伤后大鼠运动功能恢复,且环跳组优于夹脊组。2.针刺可调节坐骨神经钳夹损伤后脊髓背根神经细胞中Fas,Fas L和Caspase-8的表达,机制可能与凋亡因子Fas,Fas L和Caspase-8表达含量降低有关。3.针刺可调节坐骨神经钳夹损伤后脊髓背根神经细胞中的凋亡因子Fas,Fas L和Caspase-8含量表达,环跳组优于夹脊组。
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【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R245

【参考文献】