【摘要】：目的:波棱瓜子是藏药防治肝病的传统药物,具有清热解毒、保肝利胆等功效,临床上主要用于对肝炎的防护,以及肝病的辅助治疗。本课题组前期实验表明,波棱瓜子总木脂素部位是波棱瓜子治疗肝病的有效部位之一,对CCl4(四氯化碳)、酒精等引起的的急、慢性肝损伤和治疗ConA(刀豆球蛋白)等引起的免疫性肝损伤具有确切的保护作用。肝脏因物理、化学或药物等因素造成损伤后,机体自身会分泌各种因子自我调节,从而恢复肝脏功能及修复损伤组织,并在损伤严重时刺激肝细胞的再生,但藏药波棱瓜子总木脂素部位是否对70%(2/3)肝切除所引起的肝损伤具有修复作用和是否对肝再生具有促进作用目前尚未清楚。因此,本研究将建立小鼠70%(2/3)肝切除模型,从波棱瓜子总木脂素部位对肝功能、肝再生药效作用及机制,以及波棱瓜子总木脂素部位对不同月龄的小鼠术后肝功能、肝再生药效作用等多个方面,系统的研究藏药总木脂素部位对肝部分切除模型的损伤修复及肝再生的作用,并初步探讨其作用机制。方法:1小鼠70%(2/3)肝切除模型的建立:采用结扎切除的手术方法,建立肝脏切除模型,在无菌环境条件下通过乙醚麻醉小鼠,切开小鼠腹部暴露肝脏,取4-0医用缝合线,依次结扎小鼠的左外叶、左中叶及右中叶的肝蒂并将其切下(约切除小鼠原肝脏68%的重量),缝合腹部并等待小鼠苏醒,记录体重及肝重。以小鼠成功苏醒并活动自由作为手术成功的标志。2藏药波棱瓜子总木脂素部位对小鼠70%(2/3)肝切除术后肝功能及肝再生的影响:(1)藏药波棱瓜子总木脂素部位对小鼠70%(2/3)肝切除术后肝脏修复的影响:小鼠平均分为空白组、模型(手术)组、丹参注射剂组、总木脂素(15 g/kg)组和总木脂素(25 g/kg)组,建立小鼠70%(2/3)肝切除模型,(1)通过生化检测肝切除小鼠血清中AST、ALT、ALB含量及小鼠再生肝组织中CRP含量,观察药物对小鼠术后肝功能的影响;(2)通过组织病理检测小鼠肝脏组织形态,免疫组织化学方法检测肝切除小鼠再生肝组织中PCNA和Ki67蛋白的表达,记录肝重并计算肝再生率,观察药物对小鼠术后肝再生的影响。(2)藏药波棱瓜子总木脂素部位对不同月龄小鼠70%(2/3)肝切除术后肝脏修复的影响:小鼠按月龄分成4组,即低龄模型组、低龄总木脂素25 g/kg组和高龄模型组、高龄总木脂素25 g/kg组,建立小鼠70%(2/3)肝切除模型,(1)通过生化检测肝切除小鼠血清中AST、ALT、ALB含量,观察药物对不同月龄小鼠术后肝功能的影响;(2)肝通过组织病理检测小鼠肝脏组织形态,免疫组织化学方法检测肝切除小鼠再生肝组织中PCNA蛋白的表达,观察药物对不同月龄小鼠术后肝再生的影响。3藏药波棱瓜子总木脂素部位对小鼠70%(2/3)肝切除术后肝脏修复的影响机制:建立小鼠70%(2/3)肝切除模型,检测肝切除小鼠再生肝组织中IL-6、NF-κB和TNF-a的含量,初步探讨药物对小鼠术后肝脏的修复机制。结果:1小鼠70%(2/3)肝切除模型的建立:从麻醉小鼠到缝合并消毒切口,完成一只小鼠手术的时间为15~20 min。实验在确保每组小鼠存活数量的前提下,小鼠实施手术的成功率为93.4%。手术成功的小鼠术后能够自由活动,正常饮食,腹部伤口愈合良好。2藏药波棱瓜子总木脂素部位对小鼠70%(2/3)肝切除术后肝功能及肝再生的影响:(1)藏药波棱瓜子总木脂素部位对小鼠70%(2/3)肝切除术后肝脏修复的影响:相比空白组,术后模型组小鼠的AST升高而ALB减少,ALT及CRP的含量在7 d左右达到峰值,血清中其酶活力随术后时间变化呈现下降趋势,但效果缓慢,通过给予相应剂量的总木脂素和丹参注射剂后,与模型组相比,给予总木脂素的小鼠可见AST和ALT随时间有不同程度的下降趋势,CRP含量明显下降,ALB的含量上调;观察小鼠肝组织病理,各组小鼠肝脏细胞在术后短期内出现细胞坏死、水肿及炎症,与模型组相比,给予相应药物的小鼠细胞情况得以改善,肝脏细胞增殖数量逐渐增多,细胞的形态也随时间的变化趋于正常;观察小鼠术后PCNA和Ki67表达,与空白组和模型组对比,各给药组小鼠PCNA和Ki67蛋白的表达在后期均有不同程度的增加。(2)藏药波棱瓜子总木脂素部位对不同月龄小鼠70%(2/3)肝切除术后肝脏修复的影响:不同月龄小鼠在肝切除术后AST及ALT升高,ALB的含量随时间有不同程度的减少,与模型组比较,通过给予总木脂素的小鼠AST和ALT随时间有不同程度的下降趋势,而ALB的含量均随时间有所上调;观察不同月龄小鼠术后组织病理,模型组小鼠在1 d时出现大量的水肿、空泡变性和坏死,随时间细胞开始出现少量的分裂增殖现象,与模型组比较,不同月龄总木脂素组小鼠术后肝细胞出现少量、轻度的空泡样变或颗粒变性,肝细胞核分裂相增多,细胞体积变小,数量增多,肝细胞结构相对完整;观察小鼠术后PCNA表达,与模型组对比,给予总木脂素的不同月龄小鼠的PCNA蛋白表达在后期均有不同程度的增加,但不同月龄小鼠间比较并无统计学意义。3藏药波棱瓜子总木脂素部位对小鼠70%(2/3)肝切除术后肝脏修复的影响机制:与空白组比较,模型组小鼠术后IL-6、NF-κB和TNF-a的表达均有不同程度的上升,与模型组比较,给予总木脂素的肝切除小鼠能够不同程度的降低前期IL-6、NF-κB和TNF-a的含量,提示机制可能与抑制IL-6/STAT-3等信号通路有关,藏药波棱瓜子总木脂素部位能够减轻手术引起的损伤及炎症,保护肝脏。结论:以上实验表明,藏药波棱瓜子总木脂素部位对70%肝切除小鼠具有一定的保护作用,对肝损伤有一定的修复作用,能够促进肝脏再生及延长再生时间,抑制IL-6/STAT-3等信号通路,对不同月龄的肝切除小鼠同样具有抗炎抗损伤及促进肝再生作用,推测其机制可能与减轻炎症因子的释放、减少炎症、恢复细胞形态有关。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：西南民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R29
【参考文献】
相关期刊论文 前10条
1 王蕾;刘思洋;孙宁阳;李佳川;顾健;;波棱素对ConA诱导的免疫性肝损伤的影响[J];中药药理与临床;2016年06期
2 王蕾;刘思洋;孙宁阳;李佳川;顾健;;藏药波棱瓜子有效成分波棱素对ConA诱导的免疫性肝损伤的保护作用[J];西南民族大学学报(自然科学版);2016年05期
3 吴雄伟;郑永霞;蔺红梅;陈宇婷;黄兴望;黄珍婷;徐琴;林敏;肖燕萍;;肝再生机制的研究进展[J];四川生理科学杂志;2016年02期
4 刘子荣;张雅敏;;肝脏再生相关调控因子的研究进展[J];山东医药;2015年45期
5 吴雄伟;张丹琴;胡惠琼;杨金妮;何宗麟;郑永霞;;肝干细胞移植的研究进展及其应用前景[J];四川生理科学杂志;2015年03期
6 赵晓兰;;丹参的药用研究进展[J];品牌(下半月);2015年06期
7 赵兴冉;章雷;李佳川;顾健;;藏药波棱瓜子总木脂素对四氯化碳(CCl_4)致化学性肝损伤小鼠保护作用[J];西南民族大学学报(自然科学版);2015年02期
8 王政禄;郑虹;;肝干细胞及其应用的研究进展[J];实用器官移植电子杂志;2015年01期
9 张鑫;谭睿;顾健;何黎黎;章雷;龚普阳;;波棱素脂质体冻干粉针的制备及初步安全性和药效学研究[J];中国中药杂志;2014年16期
10 顾健;李佳川;樊利娜;;藏药波棱瓜子总木脂素对刀豆球蛋白(ConA)致免疫性肝损伤小鼠保护作用及其机制探讨[J];西南民族大学学报(自然科学版);2014年03期
相关博士学位论文 前2条
1 唐光华;肝切除术后对抗过度炎症反应的方法和机制研究[D];北京协和医学院;2015年
2 李建听;晚期糖基化终产物修饰蛋白质诱导人胚胎肝细胞产生C反应蛋白及其作用机制研究[D];第一军医大学;2006年
相关硕士学位论文 前2条
1 周雪杉;藏药波棱瓜子木脂素类成分系统研究[D];西南交通大学;2014年
2 巩法强;藏药波棱瓜子化学成分的研究[D];山东中医药大学;2012年
，
本文编号：
2478406
本文链接：https://www.wllwen.com/zhongyixuelunwen/2478406.html
