不同时间点针刺介入对心肌缺血大鼠脑损伤神经元保护作用的研究

发布时间：2017-03-16 04:02

  本文关键词：不同时间点针刺介入对心肌缺血大鼠脑损伤神经元保护作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的观察心肌缺血后不同时间点脑损伤程度的变化,以及不同时间点针刺介入对心肌缺血大鼠海马神经元Bax、Bcl-2蛋白的变化,探讨针刺干预对心肌缺血大鼠海马神经元的保护作用及部分机理,为临床选择较佳时机针刺介入提供实验依据,也为“心主神明”理论研究奠定实验基础。方法1.选用健康SD大鼠60只(质量为220±20g),随机分为伪手术组、即刻组、24h组、3d组、5d组,每组8只,余下常规饲养,以备补充实验用。伪手术组只开胸不做冠状动脉血管结扎,其他各组均制成心肌缺血模型,分别在造模后立刻、24h、3d、5d后处死取材,通过光镜、透射电镜观察大鼠海马组织形态学和超微结构变化,免疫组化法检测各组海马神经元Bax、Bcl-2蛋白的表达。2.选用健康SD大鼠60只(质量为220±20g),随机分为伪手术组、模型组、即刻针刺组、24h针刺组、3d针刺组,每组8只,余下常规饲养,以备补充实验用。伪手术组只开胸不做冠状动脉血管结扎,其他各组均制成心肌缺血模型。选双侧神门、心俞电针治疗,伪手术组、模型组不做针刺治疗,其余各组分别在造模后立刻、24h、3d后电针治疗,每次30min,每日一次,连续7天,待结束点,在第11日取材,观察、检测相关指标:光镜下观察海马组织形态学改变;免疫组化法检测海马神经元Bax、Bcl-2蛋白的表达;RT-PCR法检测海马神经元BaxmRNA、Bcl-2 mRNA的相对表达量。结果1.心肌缺血大鼠不同时间点脑损伤程度变化(1)光镜下观察各组海马组织形态学变化:伪手术组海马组织神经元细胞分布较清晰、排列整齐、形态较为完整,胞核呈蓝色,多为椭圆形、圆形或锥形,轮廓清晰,染色较为均匀;模型各组出现不同程度神经元细胞分布模糊、排列不齐、细胞减少、染色不均。即刻组、24h组、3d组、5d组呈逐渐加重趋势。(2)透射电镜观察海马组织超微结构变化:伪手术组海马神经元结构整体完好,模型各组不种程度出现神经元细胞器含量减少、肿胀、扩张,病理改变依次随时间而加重。(3)免疫组织化学法检测海马组织中Bax、Bcl-2蛋白的表达:阳性表达物主要分布在神经细胞内,以小颗粒分布为主,部分呈现聚集分布。伪手术组、即刻组、24h组、3d组、5d组Bax的表达依次增多,Bcl-2的表达依次减少,各组间进行两两比较,除3d组与5d组无统计学差异(P0.05),其他各组间均具有统计学意义(P0.01)。2.不同时间点针刺介入对心肌缺血大鼠脑损伤海马神经元Bax、Bcl-2调控的作用(1)光镜下观察海马形态学变化:伪手术组神经元细胞分布清晰、排列整齐、形态完整,胞核呈蓝色,形状多为椭圆形、圆形或锥形状,轮廓清晰,染色均匀;模型组神经元细胞分布模糊、排列不齐、细胞减少、染色不均;针刺各组较模型组病理改变均有所减轻,其中即刻针刺组改善最为明显,24h针刺组、3d针刺组改善依次变差。(2)免疫组织化学法检测各组Bax、Bcl-2蛋白的表达:各组Bax、Bcl-2阳性细胞均有表达,其中Bax:模型组3d针刺组24h针刺组即可针刺组伪手术组;Bcl-2:模型组3d针刺组24h针刺组即可针刺组伪手术组;各组分别进行组间两两比较,均具有统计学意义(P0.01)。(3)RT-PCR法检测各组Bax mRNA、Bcl-2 mRNA相对表达量:检测结果和免疫组织化学法检测一致,针刺可以上调海马组织中Bcl-2 mRNA水平的表达,下调Bax mRNA水平的表达,且即可针刺组明显优于24h针刺组、3d针刺组,24h针刺组优于3d针刺组。结论1.大鼠心肌缺血可导致脑损伤,即刻组、24h组、3d组、5d组损伤程度依次加重,3d组与5d组差异不明显,其机制可能与凋亡因子Bax、Bcl-2的表达相关。2.电针可对心肌缺血大鼠脑损伤海马神经元起到保护作用;其保护作用机制可能与电针能下调大鼠脑组织Bax及Bax mRNA水平的表达,上调Bcl-2及Bcl-2 mRNA水平的表达有关。3.针刺治疗心肌缺血脑损伤应在心肌缺血出现的早期,这样更有利于发挥针刺下调Bax上调Bcl-2蛋白以及其相应mRNA的表达的作用,从而达到保护大脑神经元的目的。
【关键词】：心肌缺血 脑损伤 不同时间点 电针 Bax Bcl-2 神门 心俞
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R245
【目录】：

• 一、中文摘要7-9
• 二、Abstract9-12
• 三、缩略词中英文对照表12-13
• 四、前言13-16
• 五、技术路线图16-17
• 六、实验研究17-48
• 实验一 心肌缺血大鼠不同时间点脑损伤程度变化17-31
• 1.材料17-18
• 1.1 实验动物17
• 1.2 材料与试剂17
• 1.3 主要仪器17-18
• 1.4 软件18
• 2.方法18-23
• 2.1 动物选择及分组18-19
• 2.2 模型复制19-20
• 2.2.1 复制方法19
• 2.2.2 纳入标准19
• 2.2.3 剔除标准19-20
• 2.3 标本采集20
• 2.4 观察指标20-22
• 2.4.1 HE染色步骤20
• 2.4.2 免疫组化操作步骤20-21
• 2.4.3 电镜检测21-22
• 2.5 统计学方法22-23
• 3.实验结果与分析23-30
• 3.1 心肌缺血模型大鼠心电图结果23-24
• 3.2 HE染色光镜下检测24-25
• 3.3 透射电镜检测25-26
• 3.4 免疫组化法检测各组大鼠海马神经元Bax蛋白表达26-28
• 3.5 免疫组化法检测各组大鼠海马神经元Bcl-2 蛋白表达28-30
• 4.小结30-31
• 实验二 不同时间点针刺介入对心肌缺血大鼠脑损伤海马神经元Bax、Bcl-2 调控的作用31-48
• 1.实验材料31-33
• 1.1 实验动物31
• 1.2 主要试剂31-32
• 1.3 主要仪器32-33
• 1.4 软件33
• 2.实验方法33-37
• 2.1 动物选择、分组及模型制备33-34
• 2.2 针刺治疗34
• 2.2.1 穴位选择34
• 2.2.3 针刺方法34
• 2.3 标本采集34
• 2.4 指标检测34-37
• 2.4.1 HE染色光镜检测35
• 2.4.2 免疫组化法检测海马组织Bax、BCl-2 的表达35
• 2.4.3 RT-PCR检测各组海马组织BaxmRNA、Bcl-2mRNA的表达35-37
• 2.5 统计学方法37
• 3.实验结果与分析37-46
• 3.1 HE染色光镜观察37-38
• 3.2 免疫组织化学法检测Bax、Bcl-2 蛋白变化结果与分析38-42
• 3.2.1 免疫组化法检测各组大鼠海马组织Bax蛋白的表 达38-40
• 3.2.2 免疫组化法检测各组大鼠海马组织Bcl-2 蛋白的表达40-42
• 3.3 实时荧光定量PCR检测结果与分析42-46
• 3.3.1 RT-PCR技术检测Bax、Bcl-2 基因含量的溶解曲线图42-43
• 3.3.2 RT-PCR技术检测Bax、Bcl-2 基因含量的扩增曲线图43-44
• 3.3.3 各组海马组织BaxmRNA、Bcl-2mRNA相对表达量变化比较44-46
• 4.小结46-48
• 七、讨论48-55
• 1.“心主神明”理论及现代研究48-49
• 2.心肌缺血脑损伤研究进展49
• 3.凋亡基因Bax、Bcl-2 在心肌缺血脑损伤中的应用研究49-52
• 3.1 凋亡基因Bax、Bcl-2 的概述49-50
• 3.2 Bax、Bcl-2 作用机制50
• 3.3 在治疗心肌缺血中的应用研究50-51
• 3.4 在治疗脑损伤中的应用研究51-52
• 4. 穴位选取依据52-53
• 5. 心肌缺血后脑组织形态学改变及针刺对其影响53
• 6. 心肌缺血大鼠脑损伤不同时间点Bax、Bcl-2 的变化及针刺对其影响53-55
• 八、结论55-56
• 九、不足与展望56-57
• 十、创新57-58
• 十一、参考文献58-65
• 十二、附件材料65-75
• 附件材料 1：综述65-73
• 参考文献69-73
• 附件材料 2：研究生在读期间发表论文和参与课题情况73-74
• 附件材料 3：个人简介74-75
• 十三、致谢75

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