傣药雅解沙把和中药苦参的抗过敏作用研究

发布时间：2017-03-16 07:01

  本文关键词：傣药雅解沙把和中药苦参的抗过敏作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:“雅解沙把”是傣医药学体系中用以调节机体四塔、五蕴功能,解除人体毒素,保护脏腑功能的重要解毒方,但是其物质基础和治疗食物过敏的机制尚不清楚。故本课题组利用HPLC-DAD法对“雅解沙把”中两个生物碱类成分巴马汀、小檗碱进行含量测定,以期阐明“雅解沙把”的物质基础,建立Balb/C雌性小鼠食物过敏模型,探索“雅解沙把”治疗食物过敏的作用机制。另一方面,本课题组采用2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱导的昆明种雄性小鼠过敏性皮肤病模型,对治疗皮肤病常用中药苦参抗过敏性皮炎的机制进行了探索,为其临床合理用药提供依据。方法:1.通过正交实验确定雅解沙把样品中巴马汀、小檗碱提取方法,建立HPLC法测定傣药“雅解沙把”中巴马汀、小檗碱含量,并进行方法学考察。2.建立卵蛋白致敏的Balb/C小鼠模型,给予“雅解沙把”低、中、高剂量以及阳性药氯雷他定、巴马汀、小檗碱,记录给药后小鼠的搔痒频率,对不同组别小鼠血清中的Ig E、Ig G及其他相关细胞因子含量进行检测,同时采用流式细胞术对小鼠脾脏中CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的水平进行检测。3.通过2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱导昆明种雄性小鼠建立过敏性皮肤病模型,在造模过程中,灌胃给药阳性药氯雷他定、苦参低、高剂量及其主要单体成分氧化苦参碱低、高剂量,记录给药一定时间后小鼠的搔痒频率,耳片厚度差值,小鼠胸腺、脾腺指数,采用酶联免疫吸附试剂法(Elisa)对不同组小鼠血清中的IL-2、IL-6、IL-10、TGF-β细胞因子含量进行检测,最后采用流式细胞术对小鼠脾脏中的CD4~+CD25~+、CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的水平进行检测。结果:1.用100 ml流动相超声提取雅解沙把样品30 min,在色谱柱为TSK gel ODS-100V(4.6 mm×250 mm),流动相是乙腈-0.4%磷酸(32:68),1 ml·min-1流速,345nm检测波长,柱温40℃的色谱条件下,雅解沙把中巴马汀、小檗碱的含量分别为1.49、0.50 mg·g-1。2.在对“雅解沙把”治疗食物过敏的作用机制研究中,卵蛋白致敏模型组在50 h、98 h点小鼠搔痒次数比正常组高,氯雷他定组、巴马汀组、小檗碱组、雅解沙把中剂量(3.50 g/kg)和雅解沙把高剂量(4.70 g/kg)小鼠搔痒次数相比于模型组均有所降低,雅解沙把低剂量组与模型组相比没有无差别。50 h时刻,模型组中Ig E含量相比于正常组升高了6.9%,但是98 h时,血清中Ig E回归到最低水平。巴马汀和雅解沙把高剂量组能够逆转血清中Ig E的提高。与正常组相比,50 h时刻OVA致敏即模型组能够显著降低血清中Ig G含量。且这种OVA诱导的血清中Ig G的降低能够被雅解沙把部分逆转。其他细胞因子,如IL4,IL-10和TNF-α,与正常组相比,模型组均没有显著性差异。雅解沙把低、中、高剂量组,巴马汀组,小檗碱组以及阳性药氯雷他定组的小鼠搔痒次数低于模型组,脾脏中CD4~+CD25~+调节性T细胞的比率雅解沙把高剂量组(12.50%)明显高于模型组(6.80%),且Foxp3在脾脏淋巴细胞中的表达,雅解沙把高剂量组远远大于模型组。3.在中药苦参抗过敏性皮炎研究中,实验进行到第13天,正常组小鼠的搔痒频率为0.51次min-1每只,DNFB模型组小鼠搔痒频率(1.07次min-1每只)高于正常组。苦参提取物低剂量组、氧化苦参碱低、高剂量组的搔痒次数相比于模型组有明显降低。苦参提取物高剂量和阳性药氯雷他定组与模型组相比物无明显差别。正常组小鼠耳片厚度差值远远低于模型组。苦参提取物低、高剂量组的耳片厚度差值相比于模型组有所降低,且苦参提取物低剂量组小鼠的耳片厚度差值接近于正常组,因此苦参提取物低剂量对于过敏性皮炎具有较好的疗效。阳性药氯雷他定和氧化苦参碱低、高剂量组与模型组相比,无显著差异。从CD4~+CD25~+水平来看,与正常组(13.1%)相比,DNFB致敏能够显著地降低脾脏中CD4~+CD25~+/CD4~+的水平(10.24%)。氯雷他定组(11.12%)、苦参提取物低剂量组(13.18%)、苦参提取物高剂量(14.54%)、氧化苦参碱高剂量组(15.51%)脾脏中CD4~+CD25~+/CD4~+的水平均高于模型组,尤其是氧化苦参碱单体高剂量对CD4~+CD25~+水平的提升起到很大的作用。这表明,氧化苦参碱能够有效地提升CD4~+CD25~+调节性T细胞在脾脏中的表达。相比于正常组(13.78%),模型组小鼠Foxp3(10.24%)的表达降低了25.69%,氯雷他定组Foxp3(13.38%)的表达与正常组接近。苦参低剂量组(13.48%)和苦参高剂量组(18.62%)Foxp3的阳性表达亦高于模型组。氧化苦参碱碱高剂量(11.43%)对小鼠Foxp3的表达亦有一定的促进作用,但不是很明显。结论:1.本研究所建立的雅解沙把中巴马汀、小檗碱HPLC-DAD检测方法,灵敏,稳定,重复性好。测试结果显示,巴马汀、小檗碱是雅解沙把方剂中的主要成分,可能是其治疗各种病症的主要物质基础。2.雅解沙把能够降低OVA致敏小鼠的搔痒次数,通过升高CD4~+CD25~+Foxp3~+在脾脏中比例来消除食物过敏反应,巴马汀可以认定为雅解沙把的主要活性成分之一。3.苦参提取物对DNFB诱导的过敏性皮炎有一定的控制作用,其作用机制可能为升高调节性T细胞中CD4~+CD25~+Foxp3~+的水平,减弱DNFB所诱导的炎症。氧化苦参碱是其主要的活性物质。
【关键词】：雅解沙把 食物过敏 苦参 过敏性皮炎 CD4~+CD25~+Foxp3~+
【学位授予单位】：云南中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R29
【目录】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 第一章 HPLC测定傣药雅解沙把中巴马汀、小檗碱11-18
• 第一节 前言11-12
• 第二节 实验材料与方法12-16
• 一、仪器与试药12
• 二、方法与结果12-16
• 第三节 实验结果与讨论16-17
• 一、实验结果16
• 二、讨论16-17
• 参考文献17-18
• 第二章 “雅解沙把”及其单体成分抗食物过敏的机制研究18-32
• 第一节 前言18-19
• 第二节 实验材料与方法19-23
• 一、实验材料19-21
• 二、实验方法21-23
• 第三节 实验结果与讨论23-32
• 一、实验结果23-30
• 二、讨论30-32
• 第三章 中药苦参抗过敏性皮炎的作用研究32-45
• 第一节 前言32-33
• 第二节 实验材料与方法33-36
• 一、实验材料33-35
• 二、实验方法35-36
• 第三节 实验结果与讨论36-43
• 一、实验结果36-42
• 二、讨论42-43
• 参考文献43-45
• 第四章 总结与展望45-47
• 第五章 傣医解药“雅解沙把”的研究进展47-54
• 第一节 雅解沙把的临床应用47-48
• 第二节 雅解沙把的药理研究进展48-49
• 第三节 雅解沙把与食物过敏的关系49
• 第四节 食物过敏机制及与其相关的当前热点调节性T细胞研究概况49-51
• 第五节 展望51-52
• 参考文献52-54
• 攻读硕士学位期间发表文章54-55
• 致谢55

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