胃溃疡模型大鼠“同功穴”与肥大细胞相关性及电针干预后对胃组织蛋白翻译后修饰的研究

发布时间：2020-05-05 20:29

【摘要】：目的:以胃溃疡模型大鼠为观察对象,采用免疫荧光技术,通过观察疾病状态下,相关“同功穴”穴区肥大细胞的形态、功能变化,及其表达的化学成分如5-HT、HA、CGRP、SP等的变化,探讨“同功穴”敏化反应和针刺发挥效应的物质基础;并进一步观察电针足三里穴及合募配穴对应激性胃溃疡模型大鼠胃组织蛋白翻译后修饰的差异,为今后针刺治疗本病的穴位优选及配伍提供科学依据。方法:选取胃脘痛的“同功穴”中出现频次最高,且分别位于腹部、背部、上肢和下肢的4个腧穴,即中脘穴、胃俞穴、内关穴、足三里穴,另取4个分别分布于腹部、背部、上肢和下肢的非胃脘痛的“同功穴”作为对照,即关元穴、肝俞穴、曲池穴、三阴交穴。根据实验步骤:麻醉→点穴→灌流→取皮肤组织→冷冻切片→免疫荧光染色→封片,观察8个穴位在正常大鼠、胃溃疡模型大鼠穴区皮肤组织中存在的肥大细胞(MC)与降钙素基因相关肽(CGRP)、五羟色胺(5-HT)、组胺(HA)和P物质(SP)等化学成分的阳性表达情况,并进行统计学分析。进一步选取胃脘痛“同功穴”中常用于治疗胃腑病的足三里穴,对胃溃疡模型大鼠进行电针刺激,并与模型组进行对照,探讨针刺效应与腧穴敏化之间的联系。最后,通过蛋白翻译后修饰技术,根据实验步骤:蛋白提取→蛋白定量→电泳→转膜→膜封闭→孵育一抗→孵育二抗→曝光→结果分析,从蛋白层面探索针刺单穴与配伍腧穴对脏腑的效应差异。结果:1.在生理状态下,腹部和背部腧穴局部皮肤组织中MC含量较少,而四肢上的腧穴局部皮肤组织中MC含量相对较多;5-HT和HA广泛存在于皮肤组织中,且往往与MC呈现共同阳性表达;不同部位的腧穴,其局部皮肤组织中CGRP阳性表达有差异:腹部较少,背部极少,四肢部位相对较多;不同部位的腧穴,其局部皮肤组织中SP阳性表达有差异:腹部和背部极少,四肢部位相对较多;部位相近的腧穴,其局部皮肤组织中化学物质的成分相同、数量相近。2.与正常大鼠相比,胃溃疡模型大鼠的中脘穴、关元穴、胃俞穴、内关穴、曲池穴、足三里穴、三阴交穴的MC、5-HT、HA、CGRP、SP的阳性表达多有明显增加,而肝俞穴MC变化不明显,但肝俞穴的5-HT、HA显著增加。胃脘痛的“同功穴”——中脘穴、胃俞穴、内关穴、足三里穴与部位相近的非“同功穴”相比,其中中脘穴、胃俞穴、足三里穴MC、5-HT、HA的阳性表达数量更多,中脘穴和足三里穴CGRP和SP的阳性表达纤维更长。此外,胃溃疡模型大鼠穴区皮肤组织部分MC有脱颗粒现象发生。3.与胃溃疡模型大鼠“足三里穴”区MC阳性表达含量相比,电针干预胃溃疡模型大鼠“足三里穴”后,能够使MC进一步富集,数量增加,且MC脱颗粒率亦增加;5-HT和HA的阳性表达数量增加;穴区皮肤组织中CGRP和SP的纤维长度增加。说明MC、5-HT、HA和CGRP、SP等是针刺发挥作用的物质基础。4.在电针单穴与配伍腧穴干预胃溃疡模型大鼠的实验中,空白组、模型组、单穴组、腧穴配伍组之间从WB修饰筛选谱图中可看到差异显著,且受到2-羟基异丁酰化、丙二酰化、琥珀酰化、乙酰化、磷酸化的显著调控。结论:1.疾病状态下,与病症相关的“同功穴”会发生特异性的敏化反应。2.MC、5-HT、HA、CGRP、SP是腧穴发生敏化反应的重要物质基础。3.MC、5-HT、HA、CGRP、SP是针灸发挥效应的重要载体。4.针刺单穴与配伍腧穴对脏腑组织具有不同的调控作用。
【图文】：

长春中医药大学 2019 届博士学位论文30图1 大鼠“足三里”穴区皮肤组织肥大细胞与血管的分布特征3.2 正常大鼠穴区皮肤组织肥大细胞及相关化学物质的表达3.2.1 正常大鼠“中脘穴”与“关元穴”皮肤组织肥大细胞及相关化学物质的表达观察发现，正常大鼠 中脘穴 和 关元穴 穴区MC主要分布在皮下组织，且数量较少；穴区皮下组织中有少量CGRP呈阳性表达；5-HT在真皮层和皮下组织均有阳性表达；HA主要分布在皮下组织；5-HT和HA常与肥大细胞呈现共同表达；腹部穴区SP的表达极少。如图2所示。图2 正常大鼠“中脘穴”与“关元穴”皮肤组织MC及相关化学物质的表达注：图中箭头所指为MC（绿色），方框中是与MC相关的CGRP、5-HT、HA的阳性表达（红

少；穴区皮下组织中有少量CGRP呈阳性表达；5-HT在真皮层和皮下组织均有阳性表达；HA主要分布在皮下组织；5-HT和HA常与肥大细胞呈现共同表达；腹部穴区SP的表达极少。如图2所示。图2 正常大鼠“中脘穴”与“关元穴”皮肤组织MC及相关化学物质的表达注：图中箭头所指为MC（绿色），，方框中是与MC相关的CGRP、5-HT、HA的阳性表达（红
【学位授予单位】：长春中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245.97;R-332

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 张坤;徐东升;崔晶晶;张知云;景向红;白万柱;;P物质在大鼠“三阴交”穴区相关感觉神经元和神经纤维中的表达[J];针刺研究;2015年06期

2 胡霞;王华;李佳;刘建民;吴松;唐宏图;徐海波;韩俊洲;;左、右后溪穴激活脑功能区相关性fMRI比较研究[J];上海针灸杂志;2015年12期

3 章薇;谭志高;曹卷舒;龚后武;覃佐爱;钟峰;曹越;魏艳蓉;;基于数据挖掘技术探析古代针灸治疗尿失禁的用穴规律[J];中国针灸;2015年12期

4 龙贤齐;姜会梨;任秀君;冀丽丽;图娅;;穴位配伍作用的神经体液及免疫机制研究进展[J];针刺研究;2015年04期

5 汪林英;徐春生;朱一芳;李传富;杨骏;;针刺左、右侧合谷穴脑功能偏侧性的fMRI研究[J];中国针灸;2015年08期

6 陈雷;冯鑫鑫;张奕;应荐;;特发性面神经麻痹患者翳风穴红外热像图研究[J];中华中医药学刊;2015年07期

7 卞镝;陈以国;隋月皎;田辉;刘玉丽;曹锐;李成林;李宝岩;;针刺“内关”对心肌缺血大鼠电压-门控钠离子通道α亚单位和β亚单位蛋白表达的影响[J];针刺研究;2015年01期

8 陈波;李明月;郭义;赵雪;刘阳阳;;肥大细胞源性外来体参与构建针刺穴位效应启动小网络的探讨[J];针刺研究;2015年01期

9 徐小茹;王富春;;胃脘痛“同功穴”分析[J];吉林中医药;2015年02期

10 王强玉;孙立明;孙立虹;刘欢欢;李新华;;原发性痛经患者足三阴经原穴电阻变化规律的研究[J];世界最新医学信息文摘;2015年02期

相关硕士学位论文 前2条

1 屈箫箫;面部穴位温度和血流灌注对称性及针灸对其调整作用[D];中国中医科学院;2009年

2 和婧伟;大鼠不同部位穴位的形态学观察[D];中国中医科学院;2006年

本文编号：2650710