化痰开窍电针对高血脂合并脑缺血大鼠SVZ区GFAP和NGF表达影响

发布时间：2020-05-08 12:46

【摘要】：目的:探讨(1)“化痰开窍”电针法对高血脂合并脑缺血模型大鼠血脂、行为学、脑组织形态学和缺血侧室管膜下区(SVZ区)、脑缺血半暗带区胶质细胞原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)表达的影响。(2)电针对单纯脑缺血大鼠行为学、脑梗死体积以及缺血侧SVZ区GFAP和NGF蛋白表达的影响。方法:实验一:将90只雄性SD大鼠随机分为正常组、高血脂合并假手术组、高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血电针1组和2组。除正常组,其余各组大鼠均采用高脂饲料喂养42天,电针1组采用“丰隆”穴两侧电针,每天1次,连续7天。第50天,模型组和电针组用50%FeCl3诱导建立高血脂症合并大脑中动脉血栓闭塞模型,术后电针组采用电针“丰隆”和“百会”穴,每日1次,连续14天。采用生物化学法测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)水平,采用神经功能评分评估行为学改变,HE染色观察形态学改变,免疫组化法检测SVZ区、缺血半暗带区GFAP和NGF蛋白的表达。实验二:将72只雄性SD大鼠随机分为脑缺血模型组,假手术组,电针1组和电针2组。普通饲料喂养,电针1组电针两侧“丰隆”穴,每天1次,连续7天,第8天,用50%FeCl3诱导建立大脑中动脉血栓闭塞模型,电针1、2组电针“百会”、“丰隆”穴,每日1次,连续7天。采用神经功能评分法评估行为学改变,氯化三苯四氮唑(TTC)染色用于检测大鼠脑梗塞体积。免疫组化法检测大鼠脑缺血后第1,7天SVZ区的GFAP和NGF蛋白的表达。结果:实验一:(1)神经行为学:模型组大鼠神经功能评分较高,出现缺血侧前肢屈曲,后肢无力,向健侧转圈等神经缺损症状。电针1组神经缺损症状明显轻于模型组,有统计学意义(P0.05)。与电针2组比较,电针1组大鼠神经功能缺损症状缓解较为明显。(2)血脂四项:模型组大鼠高血脂合并脑缺血术后TC、LDL升高,差异具有统计学意义(P0.01),HDL降低,差异具有统计学意义(P0.05),证明高血脂症造模成功。与模型组相比,术后7天,电针组TG降低具有统计学意义(P0.05),说明电针可能有降血脂的作用,电针1组的减少比电针2组更明显,表明预治疗降血脂的效果更好。(3)脑组织形态:假手术组脑神经元形态几乎正常,整体组织结构正常。模型组可见皱缩神经元,整体组织形态结构显脑缺血症。电针治疗后,缺血区周围水肿减轻,细胞核逐渐恢复,整体组织形态结构逐渐恢复正常。(4)免疫组化结果显示:在大鼠侧脑室背外侧伸展,术后1天,与假手术比较,模型组GFAP面密度显著增加(P0.05)。与模型组比较,电针组GFAP面密度持续增加至术后14天。术后7天,电针1组GFAP面密度和模型组比较,具有统计学意义(P0.05),电针1组面密度高于电针2组。在大鼠侧脑室外侧壁上段,术后1天,与假手术组比较,模型组GFAP面密度明显增加(P0.01)。术后7天,与模型组比较,电针1组GFAP面密度具有统计学意义(P0.05)。术后14天,与模型组比较,电针1组GFAP面密度具有统计学意义(P0.01);电针2组具有统计学意义(P0.05);与电针1组比较,电针2组GFAP面密度具有统计学意义(P0.01),电针1组面密度高于电针2组。在大鼠缺血半暗带区,术后1天,与假手术组比较,模型组GFAP面密度明显增加(P0.01)。与模型组比较,电针1组具有统计学意义(P0.05)。术后14天,与模型组比较,电针组具有统计学意义(P0.01);与电针1组比较,电针2组具有统计学意义(P0.01)。在大鼠侧脑室背外侧伸展,术后1天,与假手术组比较,模型组大鼠NGF面密度的表达明显增加。术后7天,与模型组比较,电针组NGF面密度表达升高,具有统计学意义(P0.01),电针1组NGF面密度表达高于电针2组,具有统计学意义(P0.05),并且持续升高至术后14天。在大鼠侧脑室外侧壁上段,术后1天,与假手术组比较,模型组大鼠NGF面密度的表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。术后7天,与模型组相比,电针组的NGF面密度明显升高。术后14天,与模型组比较,电针组NGF面密度持续升高,电针1组NGF面密度高于电针2组。在大鼠缺血半暗带区,术后1天,与假手术组比较,模型组升高具有统计学意义(P0.05)。术后14天,与模型组比较,电针1组具有统计学意义(p0.01)。实验二:(1)神经行为学:与模型组神经功能评分比较,电针组具有统计学意义(P0.05),提示缺血导致脑功能严重丧失,电针组大鼠患肢功能恢复,提示电针对脑缺血恢复有一定作用。(2)脑梗死体积:与模型组比较,电针组脑梗死体积减小,电针1组有统计学意义(P0.05),电针1组脑梗死体积小于电针2组。(3)免疫组化结果显示:在大鼠侧脑室背外侧伸展和侧脑室外侧壁上段,假手术组GFAP标记的面密度略有表达,模型组的表达明显高于假手术组(P0.05),电针组表达显著高于模型组,并持续至缺血后7天。假手术组NGF表达含量极少,缺血后第1天增加,术后7天最明显的改善在电针1组,假手术和电针2组也不同程度的增加,脑缺血组显示最少。结论:“化痰开窍”电针法采用在高脂血症阶段电针“丰隆”穴,脑缺血后电针“丰隆”、“百会”穴能够调节血脂代谢,促进脑缺血大鼠肢体功能康复、减少脑梗死体积,改善脑组织病理形态学变化,上调缺血侧大鼠SVZ区、缺血半暗带区GFAP和NGF蛋白,促进星形胶质细胞活化和神经生长因子的表达,恢复受损神经系统,为临床针灸治疗中风提供了理论依据。
【图文】：

电针,功能,脑缺血模型

明脑缺血模型造模成功。电针１组和电针２组的神经功能评分均低于模型组，电针１组逡逑评分又低于电针２组，提示电针１组、电针２组的神经功能缺损有所减轻，且电针１组逡逑优于电针２组。结果见表１，图１。逡逑逦表１各组大鼠神经功能缺损评分比较（无土ｓ，邋ｎ＝６）逦逡逑组别逦神经功能缺损评分ＮＤＳ邋（ｓｃｏｒｅ）逡逑假手术组逦０邋＋邋０逡逑模型组逦２．５０±０．４５”逡逑电针１组逦１．６７±０．邋４广＂逡逑电针邋２邋组逦１．８３±０．６８＂逡逑Ｆ逦４．２００逡逑逦Ｐ逦０．邋０３６逦逡逑注：与假手术比较＊＊尺0．邋０１；与模型组比较ｔｔＫＯ．邋０５。逡逑Ｓ邋４］逦■假手术组逡逑＾３－逦＂逦ＥＥ３模型组逡逑｜２．逦Ｍ邋＾邋Ｔ邋□电针１组逡逑５逦Ｂ逦ｒ＾－ｉ逦＾逦ｓ电针２组逡逑ｊｉ逦■逦１Ｂ逡逑＇逦假手术钜模型组电针１组电针２组逡逑图１各组大鼠神经功能缺损评分比较逡逑注：与假手术比较＊＊尺0．邋０１；与模型组比较＃代0．邋０５。逡逑３３逡逑

电针,大鼠,组织形态结构,脑缺血

图１各组大鼠不同时间点血脂检测结果（ｍｍｏｌ／Ｌ：邋ｊｆ士ｓ；邋ｎ＝６）逡逑Ａ：正常组；Ｂ：模型组；Ｃ：假手术组；Ｄ：电针１组；Ｅ：电针２组。注：图卜Ａ总胆固醇（ＴＣ）含逡逑量结果；图１－Ｂ甘油三酯（ＴＧ）结果：图卜Ｃ高密度脂蛋白（ＨＤＬ）结果；图卜Ｄ低密度脂蛋白结果逡逑（ＬＤＬ）结果。与正常组比较＊尺０．０５＊＊代０．０１；与模型组比较＃尺０．０５＃＃代０．０１；与假手术比较逡逑ＡＫＯ．邋０５ＡＡ代０．邋０１逡逑３．邋３脑组织形态学变化逡逑高血脂合并脑缺血术后１天，在脑皮质区，｜￡常组神经细胞核大而圆，淡染，呈均逡逑匀蓝色，核仁明显，胞质粉红色，神经元细胞相互连接构成脑组织，整体组织形态结构逡逑正常。假手术组神经元形态基本接近正常，仅有少量细胞核淡染，整体组织形态结构正逡逑常。模型组可见皱缩神经元，细胞核体积变小固缩，呈淡蓝色，胞体组织稀疏凌乱，整逡逑体组织形态结构显脑缺血症。电针１组神经元形态基本接近正常，偶见萎缩的神经细胞逡逑核，染色较深，整体组织形态结构基本正常。电针２组可见固缩神经细胞核，细胞质呈逡逑浅粉红色，，细胞边界不清，整体切片显脑缺血症（轻型）。结果见附图中图１。逡逑在脑髓质区
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245.97

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