针刺对EAE小鼠脊髓IBA-1、COX-2表达及血清TNF-α水平的影响

发布时间：2020-05-09 12:00

【摘要】：研究目的多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是发生于中枢神经系统的炎性脱髓鞘疾病,具有致残、复发、进展、致死的特点,极大的危害生命健康,且世界医学尚无治愈的方法。近年来中医治疗MS显示出较好的临床疗效,但是中医治疗MS的相关机制尚不明确,影响其在世界的推广和应用。本研究观察针刺对MS的动物模型--实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠脊髓内钙离子接头蛋白-1(IBA-1)、环氧合酶-2(COX-2)及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响,探究针刺治疗EAE小鼠可能的作用机制。研究方法将8-10周龄的36只雌性C57BL/6小鼠随机分为4组,分别为空白对照组、模型组、激素组、针刺组,每组各9只。适应性喂养1周后,空白对照组小鼠不做任何处理,其余小鼠均使用MOG35-55多肽建立EAE模型。造模后第14天开始,空白对照组、模型组:每天抓取小鼠一次;激素组:醋酸泼尼松灌胃;针刺组:针刺“大椎穴”以及双侧“肾俞”、“足三里”穴。至造模后28天取材,检测各组小鼠血清TNF-α含量、脊髓COX-2、IBA-1免疫组化阳性表达。研究结果1.与空白对照组相比,EAE造模小鼠12天开始,模型组小鼠最先出现轻度动作笨拙、步态不稳症状,神经损伤症状出现。14天时各组造模小鼠均出现神经损伤的症状,神经功能评分与空白对照组相比,具有统计学差异(P0.05)。造模小鼠Kono神经功能评分在1-4分之间,造模成功。2.与空白对照组相比,模型组小鼠血清TNF-α含量、脊髓COX-2、IBA-1平均光密度均显著升高(均P0.01)。3.与模型组相比,针刺组EAE小鼠免疫后第14天出现神经功能损伤症状,晚于模型组(免疫后第12天出现症状),针刺组EAE小鼠神经功能评分水平亦低于模型组(P0.01);针刺组EAE小鼠血清TNF-α含量22.16±2.12,显著低于模型组26.31±2.65(P0.01);针刺组EAE小鼠脊髓COX-2阳性表达平均光密度(2.86±1.18)×10-3低于模型组(12.57±3.76)X10-3(P0.01);此外,针刺组小鼠脊髓IBA-1阳性表达平均光密度(4.16±2.01)×10-3也低于模型组(5.47±1.67)×10-3(P0.05)。4.与模型组相比,激素组EAE小鼠神经功能评分较低,免疫第14天小鼠出现神经功能损症状,晚于模型组;激素组EAE小鼠血清TNF-α含量22.37±1.62,显著低于模型组26.31±2.65(P0.01);激素组EAE小鼠脊髓COX-2阳性表达平均光密度(0.74±0.61)×10-3低于模型组(12.57±3.76)X10-3(P0.01);此外,激素组小鼠脊髓IBA-1阳性表达平均光密度(0.56±0.23)×10-3也低于模型组(5.47±1.67)×10-3(P0.01)。激素组EAE小鼠血清TNF-α含量、脊髓COX-2、IBA-1表达含量均低于模型组,二者相比具有统计学差异(均P0.01)。5.与针刺组相比,激素组较EAE小鼠神经功能评分水平更低;激素组EAE小鼠血清TNF-α含量稍高于针刺组,二者相比无统计学差别(P0.05);激素组EAE小鼠脊髓COX-2阳性表达平均光密度(0.74±0.61)×10-3低于针刺组(P0.05);激素组小鼠脊髓IBA-1阳性表达平均光密度(0.56±0.23)X10-3也低于针刺组(P0.01)。结论1.本研究采用MOG35-55多肽和完全弗氏佐剂诱导雌性C57BL/6小鼠,成功建立EAE模型。2.针刺可以减轻EAE小鼠神经损伤,改善神经功能评分,且作用优于激素组。3.针刺降低EAE小鼠血清TNF-α含量效果与激素治疗相当,但针刺降低EAE小鼠脊髓COX-2、IBA-1阳性表达程度较激素治疗差。4.针刺能够改善减轻EAE小鼠神经损伤,这可能与针刺降低EAE小鼠血清TNF-α含量,减少脊髓COX-2、IBA-1阳性表达有关。
【图文】：

图１各组小鼠不同时间神经功能评分逡逑如表１可见，第０天，小鼠神经功能评分均为０分；第１２天时模型组ＥＡＥ小鼠现轻度动作笨拙、步态不稳症状，神经功能评分为（0．１１±0．邋２２）分，其余组别化；模型组第２０天时评分达到峰值（３．邋１１邋±０．４２）分，之后评分逐渐减少；针Ｅ小鼠第１４天出现动物尾部张力降低或无力，轻度步态不稳，神经功能评分为（０．邋１２５）分，第２４天评分达到峰值（１．６７±（）．邋３５）分。激素组ＥＡＥ小鼠第１４天时出力降低或无力，动作笨拙等神经功能异常症状，神经功能评分为（０．４４±０．邋３９）逡逑第２４天时神经功能评分最高（２．邋０６±０．邋３０）分，之后评分有所下降；通过统计，各组小鼠神经功能评分具有统计学差异。逡逑

图２各组小鼠不同时间神经功能评分估算边际均值逡逑主体内效应的检验，时间：Ｆ＝３４５．邋１０３，邋Ｋ０．邋０１，，不同时间各组小鼠神经功能评分有统计学差异：逡逑＊干预：Ｆ＝５８．邋８０４，邋Ｐ＜０．邋０１，时间与干预的交互作用具有统计学差异。主体间效应的检验，逡逑５９．邋１７８，邋Ｋ０．邋０１，说明组间存在统计学差异。逡逑
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245

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本文编号：2656105